[发明专利]靶向肝癌溶瘤腺病毒的构建法和应用

摘要

本发明公开了一种靶向肝癌溶瘤腺病毒的构建方法，包括如下步骤：1）、制备携带GP73核心启动子的pXC2-GP73质粒；2）、制备pSD55-GP73-gene质粒；3）、将pSD55-GP73-gene质粒用PmeI线性化后转化到含有全序列腺病毒骨架DNA的质粒Adeasy-1大肠杆菌BJ5183中重组，产生E1A区由GP73核心启动子控制的以及缺失E1B55和E3区携带目的基因的腺病毒骨架DNA质粒载体；4）、将重组鉴定正确的质粒用Pac I酶切线性化后，转染到293A细胞中进行病毒包装，待细胞出现病变后，得到目的溶瘤腺病毒GD55-gene。本发明还同时提供了上述溶瘤腺病毒GD55-gene在制备治疗肝癌药物中的应用。

主权项

靶向肝癌溶瘤腺病毒的构建方法，其特征是包括如下步骤：1）、将作为GP73核心启动子的p‑19/‑677质粒，用Xho I和SnaB I双酶切后，替换掉pXC2上E1A的野生型启动子，得到携带GP73核心启动子的pXC2‑GP73质粒；所述p‑19/‑677，其序列如SEQ ID NO：3所示；2）、用Xho I和Xba I双酶切pXC2‑GP73得到GP73‑E1A片断，与同样用Xho I和Xba I双酶切的pSD55相连，得到pSD55‑GP73；当需要携带基因时，可通过PCR获得目的基因，连接到经HindⅢ和BamH I双酶切的pCA13载体上得到pCA13‑gene，然后用BglⅡ单酶切得到完整的基因表达框，连接到同样经BglⅡ酶切的pSD55‑GP73载体上，得到pSD55‑GP73‑gene质粒；3）、将pSD55‑GP73‑gene质粒用PmeI线性化后转化到含有全序列腺病毒骨架DNA的质粒Adeasy‑1大肠杆菌BJ5183中重组，产生E1A区由GP73核心启动子控制的以及缺失E1B55和E3区携带目的基因的腺病毒骨架DNA质粒载体；4）、将重组鉴定正确的质粒用Pac I酶切线性化后，转染到293A细胞中进行病毒包装，待细胞出现病变后，得到目的溶瘤腺病毒GD55‑gene。