[发明专利]一种用无血清和牛垂体提取物培养液构建的创口贴式人工活性组织及其构建方法

摘要

本发明公开了用无血清和牛垂体提取物培养液构建的创口贴式人工活性组织及其构建方法。本发明采用未添加牛血清和垂体提取物的细胞培养液，通过对生物膜载体特殊处理，使生物膜上形成适宜细胞相互作用的微生境（niche），促进人成纤维细胞和表皮细胞发挥自身潜能，增殖、分裂及分泌生长因子，4～7天即可在生物膜上形成具有活性细胞的人工组织。人工组织细胞活性高，分裂及移行能力强，可归巢至创面，作为治愈烧烫伤和慢性溃疡的种子细胞，促进组织再生。本发明完全避免了血清、垂体提取物和胶原等动物衍生制品的免疫排斥，人畜共患病毒传染的危险，形成以生物膜为支架和感染屏障的薄层细胞组织，真正实现生物安全的创口贴式人工活性组织。

主权项

一种用无血清和牛垂体提取物培养液构建的创口贴式人工活性组织的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)医用生物膜处理：首先将医用生物膜灭菌处理，然后用氧气离子体进行3秒～1小时的等离子清洗处理；(2)细胞培养液配制：用于培养成纤维细胞的细胞培养液A，采用基础培养液DMEM，在该基础培养液DMEM中加入青霉素、链霉素双抗1～5000U/ml；用于培养表皮细胞的细胞培养液B，由以下体积百分比的物质构成：基础培养液DMEM 60％～85％；基础培养液HAM’s F‑1210％～40％；以下成分5％～15％：青霉素、链霉素双抗1～5000U/ml；两性霉素B 0.5～6000ng/ml；腺嘌呤0.06～370ng/ml；胰岛素0.02～530ug/ml；氢化可的松0.05～490ug/ml；三碘甲腺原氨酸0.03～280ng/ml；转铁蛋白0.07～460ug/ml；三者体积百分比之和为100％，制成细胞培养液；(3)采用步骤(2)配制的细胞培养液用于成纤维细胞和表皮细胞的分离与培养；(4)将步骤(3)所得成纤维细胞接种于步骤(1)的医用生物膜上，形成含成纤维细胞的人工活性组织；然后将步骤(3)所得表皮细胞接种到医用生物膜上，形成含表皮细胞的人工活性组织；将步骤(3)所得成纤维细胞和表皮细胞接种到医用生物膜上，形成含成纤维细胞和表皮细胞的人工活性组织。