[发明专利]自体血清抗原致敏DC‑CIK细胞的制备方法

摘要

本发明公开了一种自体血清抗原致敏DC‑CIK细胞的制备方法，所述自体血清抗原致敏DC‑CIK细胞的制备方法，包括步骤A）自体血清抗原的制备；B）外周血单个核细胞的制备；C）DC的分离和培养；D）CIK细胞的诱导扩增；E）DC与CIK细胞共培养制备DC‑CIK细胞。本发明所述方法培养的DC‑CIK与常规培养制备的DC‑CIK相比，其对CIK的增殖活性和杀瘤活性都明显增加，其增殖倍数平均达到了200‑250倍，是传统培养方法的2‑3倍；体外实验时杀瘤活性达到70‑80%，明显高于常规方法培养的DC‑CIK细胞。本方法工序简单，条件易控，对设备的要求较低，而所获得的DC‑CIK细胞增殖效率更高。

主权项

自体血清抗原致敏DC‑CIK细胞的制备方法，包括以下步骤：A）自体血清抗原的制备；B）外周血单个核细胞的制备；C）DC的分离和培养；D）CIK细胞的诱导扩增；E）DC与CIK细胞共培养制备DC‑CIK细胞；所述的A）步骤为取外周血50‑100ml，离心分离患者血清，加入终浓度为0.1‑1.0mg/ml的亮抑蛋白酶抑制剂进行蛋白浓缩，随后用无菌离心管存储，置于‑20℃以下环境冷冻24‑48h，取出后在0‑4℃环境中放置10‑16h，吸取上层血浆部分并弃去；56℃灭活补体成分20‑30min，微孔滤膜过滤，得到自体血清肿瘤抗原；所述步骤C）为依据肿瘤标志物测定结果，在细胞贴壁后加入终浓度为5‑20%的步骤A）制备得到的自体血清抗原进行DC致敏，在培养第6至第7天加入终浓度为200‑1000ng/ml的肿瘤坏死因子，得到自身抗原致敏后的DC。