[发明专利]永生化人软骨终板干细胞系的制备方法及其用途有效
| 申请号： | 201410088040.6 | 申请日： | 2014-03-11 |
| 公开（公告）号： | CN103865877A | 公开（公告）日： | 2014-06-18 |
| 发明（设计）人： | 黄博;刘铭汉;王海;刘兰涛;周跃 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第三军医大学第二附属医院 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;A61L27/38;C12R1/91 |
| 代理公司： | 重庆华科专利事务所 50123 | 代理人： | 康海燕 |
| 地址： | 400037 重*** | 国省代码： | 重庆;85 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明属于细胞工程技术领域，具体涉及永生化人软骨终板干细胞系的制备方法及其用途。本发明要解决的技术问题是为构建永生化人软骨终板干细胞系提供一种有效的制备方法。本发明的技术方案是采用慢病毒转染技术构建永生化人软骨终板干细胞系的制备方法，包括如下步骤：a、构建SV40T抗原病毒载体；b、SV40T抗原基因转染人终板干细胞；c、传代并筛选得到永生化软骨终板干细胞。本发明还提供了由上述方法得到的永生化人软骨终板干细胞系在制备骨组织工程材料中的用途。本发明可应用于组织工程骨的制备，为临床上一系列长骨缺损、骨不连病人提供一种价格低廉、成骨能力强的骨组织工程的种子细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 永生 软骨 终板干 细胞系 制备 方法 及其 用途 | ||
【主权项】：
永生化人退变软骨终板干细胞系的制备方法，其特征在于：将外源性猴肾病毒SV40T抗原基因转染人终板软骨干细胞而诱导获得永生化人终板软骨干细胞系；其中，外源性SV40T抗原基因通过构建成慢病毒颗粒转染人终板软骨干细胞；所述外源性SV40T抗原的核苷酸序列如序列21所示；包括如下步骤：a、构建SV40T抗原病毒载体：将表达SV40T抗原基因的逆转录病毒载体和包装载体共转染人胚肾293细胞系HEK293，包装出表达SV40T抗原的逆转录病毒；b、慢病毒转染：将人退变软骨终板原代干细胞传至第3代，使细胞密度为3×103/ml，按0.5ml/cm2培养面积添加含4μg/ml聚凝胺的逆转录病毒，病毒滴度为1×108TU/ml，感染2天后，换液并添加2ml的0.4mg/ml的潮霉素B筛选14天，形成筛选后的干细胞集落；c、传代：将筛选后的干细胞集落扩增并进行连续传至30代以上，即得到永生化的人退变软骨终板干细胞系，冻存备用。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国人民解放军第三军医大学第二附属医院，未经中国人民解放军第三军医大学第二附属医院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201410088040.6/，转载请声明来源钻瓜专利网。
