[发明专利]莲子中生物碱的电喷雾萃取电离质谱快速检测方法

摘要

本发明属于分析技术领域，具体涉及莲子生物碱的快速测定方法，步骤包括：样品处理、标准品处理，电喷雾萃取电离质谱EESI‑MS检测，绘制标准曲线，计算样品中生物碱浓度。本发明方法快速、准确、且无需复杂的样品预处理，不仅可用于复杂基体样品中生物碱的快速鉴定，结合化学计量学还可对不同陈化度的莲子样品进行有效区分。

主权项

莲子中生物碱的电喷雾萃取电离质谱快速检测方法，其特征在于包括如下步骤：（1）样品处理：取莲子，粉碎，过80目筛，称取莲子粉末各0.01g，加入1.5 mL离心管中，加入1mL 80%乙醇溶液，超声提取10 min，4000 r/min离心5min，将提取上清液作为样品待测；（2）标准品的制备：分别称取5 mg干燥至恒重的莲心碱、甲基莲心碱、莲心季铵碱、荷叶碱、O‑去甲基荷叶碱对照品，用80 % 甲醇溶解，分别配制成浓度为1.00 mg/mL对照品储备溶液；将各对照品储备溶液混合成混标上样，浓度分别为0.03，0.06，0.12，0.24，0.48，1.00 mg/mL，现配现用；（3）对标准品和待测样品分别进样检测；（4）电喷雾萃取电离质谱EESI‑MS检测时：LTQ‑MS工作在正离子检测模式，质谱扫描范围均为m/z 50~1000；电离电压为3.0 kV；毛细管温度均为250 ℃；ESI溶剂均为甲醇；雾化气为纯度99.999%氮气，压力为1.2MPa；EESI溶剂无水甲醇和样品溶液流速分别为3 μL/min和5 μL/min；两个毛细管喷雾口距离a=1 mm，夹角为60°，到质谱进样口的距离为5 mm，角度为150°，在进行串联质谱分析时，母离子的隔离窗口宽度选为1.5 Da，碰撞时间为30 ms，碰撞能量为17％~25％，其它参数由LTQ‑MS软件系统自动优化；在测定时，质谱和离子源的条件为：离子源电压为3.5 kV，离子传输管温度为250 ℃，样品进样速率为5 μL/min，其他参数设置为默认值；（5）选择离子流m/z 611、625、282、314、296分别对应莲心碱、甲基莲心碱、O‑去甲基莲心碱、莲心季铵碱和荷叶碱，与总离子流图的走势一致，离子的丰度随着进样的出现而明显增强，说明样品中存在该生物碱；（6）根据标准品生物碱浓度为横坐标，信号强度为纵坐标绘制标准曲线，根据样品中信号强度计算出样品中相应生物碱的浓度。