[发明专利]一种野生型rhNGF的制备方法

摘要

本发明公开了一种野生型β‑hNGF的制备方法，步骤为hNGF片段获取；酶切后与载体连接，诱导表达，亲和层析纯化；Factor Xa或肠激酶或Genenase I切除MBP标签蛋白，获得野生型β‑hNGF。此方法能够产业化方法，纯化得率高，纯度高。

主权项

一种野生型β‑hNGF的制备方法，其特征在于，包括如下步骤，1)hNGF片段获取：PCR扩增：上游引物5’端引入XmnI酶切识别位点序列GAAGGAGTTC，下游引物引入多克隆位点上其他任意酶切识别位点，同时下游引物的反义链3’端必须带有终止密码子；利用该对引物扩增β‑hNGF成熟肽编码序列；所述上游引物序列为SEQ ID NO:1，下游引物序列为SEQ ID NO:2，下游引物带HindIII酶切位点；2)酶切：分别双酶切PCR产物和载体并回收；所述载体为pMAL‑c2X，pMAL‑p2X；3)连接：T4连接酶连接载体和双酶切后的PCR产物，转化大肠杆菌表达菌株并进行鉴定；4)诱导表达：IPTG诱导表达；5)亲和层析纯化：麦芽糖蛋白亲和层析纯化获得MBP‑NGF重组蛋白；6)获得野生型β‑hNGF：Factor Xa切除MBP标签蛋白，获得野生型β‑hNGF。