[发明专利]一种rhNGF成熟肽的制备方法

摘要

本发明公开了一种rhNGF成熟肽的制备方法。步骤为表达载体及工程菌的构建；包涵体表达，收集菌体；包涵体裂解、洗涤、溶解、复性，得到pro-rhNGF复性液；阳离子交换层析初步纯化pro-rhNGF复性液；疏水作用层析二次纯化pro-rhNGF；胰蛋白酶酶切去除pro-rhNGF前导肽获得rhNGF成熟肽；rhNGF成熟肽的第三次纯化得到纯化的rhNGF成熟肽。本发明的方法可进行产业化生产rhNGF成熟肽，纯度高，得率高。

主权项

一种rhNGF成熟肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤，1）表达载体及工程菌的构建：人工合成SEQ ID NO:3序列，NdeI和BamHI双酶切后克隆入pET11a空载体中得到构建好的融合表达载体pET11a‑pro‑hNGF；将所述融合表达载体pET11a‑pro‑hNGF转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)得到表达工程菌；2）pro‑rhNGF的包涵体表达，收集菌体；3）pro‑rhNGF的包涵体裂解、洗涤、溶解、复性，得到pro‑rhNGF复性液；4）阳离子交换层析初步纯化pro‑rhNGF；5）疏水作用层析二次纯化pro‑rhNGF；6）胰蛋白酶酶切去除pro‑rhNGF前导肽获得rhNGF成熟肽；7）阳离子交换层析第三次纯化得到rhNGF成熟肽。