[发明专利]禾本科牧草胚根直接用于RAPD反应的制备方法及其试剂盒无效
| 申请号： | 201410023265.3 | 申请日： | 2014-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN103773870A | 公开（公告）日： | 2014-05-07 |
| 发明（设计）人： | 刘志鹏;周强;马利超;王彦荣;陈天龙 | 申请（专利权）人： | 兰州大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 兰州振华专利代理有限责任公司 62102 | 代理人： | 张真 |
| 地址： | 730000 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明主要涉及一种禾本科牧草胚根直接用于RAPD反应的方法。具体涉及禾本科牧草胚根碱处理的方法以及RAPD反应的扩增体系。一种禾本科牧草胚根直接用于RAPD反应的方法，其主要特点是包括有：禾本科牧草胚根根尖经0.25M NaOH水溶液100℃条件下处理1min，可直接作为PCR模板进行RAPD反应。其RAPD反应扩增体系的主要特点是包括有：PCR体系的总体积为20μl，其中包括2×PCR Master（上海生工产品编号：SK2082）10μl，2μl引物RAPD1或引物RAPD2，ddH2O8μl以及1～2mm经碱处理过的禾本科牧草胚根根尖。结果表明，该方法具有省时、省力、成本低、重复性强和快速便捷的特点，在我国牧草生物技术领域中具有广阔的应用前景，为我国牧草科研事业的快速发展提供先进的技术支持。 | ||
| 搜索关键词： | 禾本科 牧草 胚根 直接 用于 rapd 反应 制备 方法 及其 试剂盒 | ||
【主权项】：
一种直接用于RAPD反应的禾本科牧草胚根的制备方法，其特征是包括如下步骤：A.收集种子，采用双层滤纸萌发法，在23～27℃萌发65～80h，切取1～3cm长胚根根尖备用；B.对禾本科牧草胚根的碱处理；切取1～2cm长的胚根，放入含350～450μl0.25mol/LNaOH的Eppendorf管中，将此离心管插入沸水浴中煮1～1.5min，取出后加入350～450μl0.25mol/L HCl和200μl0.5mol/L Tris‑HCl(PH8.0)，再次将该管放入沸水中孵育3min，最后挑去1～2mm，经过上述碱处理的供试牧草的胚根直接作为PCR模板进行RAPD反应。
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