[发明专利]一种使接穗品种获得病毒抗性的方法及RNA干扰载体pCAMBIA2300-3A与转基因方法

摘要

本发明“一种使接穗品种获得病毒抗性的方法及RNA干扰载体pCAMBIA2300‑3A与转基因方法”属于植物转基因技术及其应用。(1)制备抗病毒的转基因砧木；(2)使接穗嫁接到所述转基因砧木上生长发育；其特征在于：所述抗病毒的转基因砧木为转入RNA干扰载体而获得，所述RNA干扰载体的靶标序列为目标病毒基因组内的基因片段。本发明的方法用于番茄接穗品种获得病毒抗性的试验获得了良好的效果，针对番茄的具体实施例中，构建的RNA干扰载体为为pCAMBIA2300‑1A、pCAMBIA2300‑2A、pCAMBIA2300‑2B、pCAMBIA2300‑3A、pCAMBIA2300‑CP或pCAMBIA2300‑CMV5。本发明还提供了一种改进的转基因方法。上述方法获得的抗病毒植株能够有效规避转基因食品的安全隐患，且能够大大提高了获得抗病毒转基因品种的效率。

主权项

一种使接穗品种获得病毒抗性的方法，其步骤如下：(1)制备抗病毒的转基因砧木；(2)使接穗嫁接到所述转基因砧木上生长发育；其特征在于：所述抗病毒的转基因砧木为转入RNA干扰载体而获得，所述RNA干扰载体的靶标序列为目标病毒基因组内的基因片段，所述目标病毒指黄瓜花叶病毒CMV,所述接穗品种和转基因砧木都为番茄品种，所述RNA干扰载体的靶标序列如Seq ID No.4所示，具体方法如下：所述RNA 干扰载体是利用pUCCRNAi 中两组同尾酶切位点XhoI/SalI和BglII/BamHI，将CMV 基因ORF 区间的如Seq ID No.4 所示的片段的正、反向序列构建到pUCCRNAi 的两组酶切位点中得到的具有反向重复序列的RNAi 克隆载体pUCCRNAi‑3A，将克隆载体pUCCRNAi‑3A 的反向重复区，用内切酶SalI/PstI 酶切后连接到植物表达载体pCAMBIA2300‑Actin1‑ocs 中得到具有ihpRNA 的植物表达载体pCAMBIA2300‑3A。