[发明专利]一种甘蓝小孢子单倍体植株加倍的方法

摘要

本发明公开了一种甘蓝小孢子单倍体植株加倍的方法，包括下列步骤：选择小孢子单倍体植株花薹茎生幼嫩叶片，切成1cm²的小片作为外植体；将外植体放入外植体浸泡溶液中浸泡24h～48h；把外植体接种到培养基上诱导出不定芽；待不定芽生长至3.0～3.5cm高，自不定芽基部切下将其转入生根培养基上培养，经诱导生根，获得再生苗；将再生苗在室内锻炼3～5天，再移田间遮阳网棚锻炼2～3天，随后直接移栽到纱网棚内，栽培促其生长，翌年再生植株抽薹开花鉴定倍性，获得加倍的双单倍体植株。该方法不仅克服了培养基中添加秋水仙素易导致外植体褐化死亡率高、诱芽率低等问题，而且提高了再生植株诱导率和双单倍体植株加倍率。

主权项

一种甘蓝小孢子单倍体植株加倍的方法，其特征在于，包括下列步骤：1）选择小孢子单倍体植株花薹茎生幼嫩叶片，切成1cm²左右的小片作为离体培养的外植体；2）将无菌外植体放入外植体浸泡溶液中浸泡24h～48h；3）把浸泡后的外植体接种到培养瓶内的外植体诱导培养基上，在温度25℃下，暗培养25d，随后转入光培养，12h～14h/d光照，光照强度 2000～2500Lx，经20～25天诱导出不定芽；4）待不定芽生长至3.0～3.5 cm高，自不定芽基部切下将其转入培养瓶内的生根培养基上，在温度 25℃，12h～14h/d光照，光照强度 2500～3000Lx的条件下培养，经20～25d诱导生根，获得再生苗；5）将有再生苗的培养瓶口打开，室内锻炼3～5天，再移田间遮阳网棚锻炼2～3天，随后从培养瓶中取出再生苗，洗去根部的培养基浸蘸杀菌药剂，直接移栽到纱网棚内，栽培促其生长，翌年再生植株抽薹开花，采用再生植株形态学观察与气孔保卫细胞叶绿体计数法结合的方法鉴定倍性，获得加倍的双单倍体植株；所述的外植体浸泡溶液是含有浓度为0.2～10 mg/L秋水仙素和浓度为1.0～5.0 mg/L 6‑苄氨基腺嘌呤的蒸馏水溶液。