[发明专利]PKCα-siRNA质粒载体的构建、筛选方法及应用在审
| 申请号： | 201410011031.7 | 申请日： | 2014-01-09 |
| 公开（公告）号： | CN103773789A | 公开（公告）日： | 2014-05-07 |
| 发明（设计）人： | 王金华;赵丽君 | 申请（专利权）人： | 江苏省肿瘤防治研究所 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12Q1/68;G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京纽乐康知识产权代理事务所(普通合伙) 11210 | 代理人： | 张朝元 |
| 地址： | 210000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种PKCα-siRNA质粒载体的构建及其筛选方法，包括以下步骤：1）设计及合成靶向PKCα的siRNA，2）构建PKC-αsiRNA的重组质粒载体，以及PKCα-siRNA质粒载体在卵巢癌耐药方面的应用。本发明的有益效果为：成功建立了几种靶向PKC-α的siRNA重组质粒载体（pEGFP-iLenti-PKC-α），并将pEGFP-iLenti-PKC-α导入人卵巢癌耐药细胞株用于卵巢癌耐药研究，最终筛选出逆转耐药效果最好的pEGFP-iLenti-PKC-α492。这一发明为肿瘤多药耐药的逆转研究提供了一种新方法。 | ||
| 搜索关键词： | pkc sirna 质粒 载体 构建 筛选 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种PKCα‑siRNA质粒载体的构建及其筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：1）设计及合成靶向PKCα的siRNA，进一步包括以下步骤：1.1）根据基因库PKCα基因序列筛选出候选序列；1.2）根据RNAi目标序列的选取原则优化siRNA序列；1.3）确定靶向PKC‑α的siRNA的目标序列；2）构建PKC‑α siRNA的重组质粒载体，进一步包括以下步骤：2.1）退火连接单链目的基因片段；2.2）Eco31I酶切质粒pEGFP‑iLenti；2.3）1％琼脂糖凝胶回收酶切线性空载体；2.4）连接线性化质粒载体；2.5）重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞及扩增；2.6）纯化重组质粒。
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