[发明专利]使用共同轻链制备完全人双特异性抗体的方法

摘要

提供了一种遗传修饰的小鼠，其中所述小鼠表达特征在于有限数目的轻链可变结构域的免疫球蛋白轻链库。提供了仅表达来自其种系中有限库的一种或少数免疫球蛋白轻链可变结构域的小鼠。提供了使用本文所述的小鼠制备具有包括人轻链可变区的通用轻链的双特异性抗体的方法。提供了制备适合用于多特异性结合蛋白例如双特异性抗体的人可变区的方法和宿主细胞。提供了能够结合第一和第二抗原的双特异性抗体，其中所述第一和第二抗原是单个蛋白的不同表位或两个不同蛋白上的不同表位。

主权项

一种制备双特异性抗原结合蛋白的方法，包括：(a)表达包含可变结构域的第一人免疫球蛋白重链，所述可变结构域由来源于第一遗传工程小鼠的B细胞的第一人免疫球蛋白重链可变区编码，所述第一遗传工程小鼠已用包含第一表位的第一目标抗原免疫，并且所述第一遗传工程小鼠：(i)具有对于可操作地连接至鼠Cκ区的单一的经重排的人免疫球蛋白轻链可变区序列是纯合或杂合的种系，所述人免疫球蛋白轻链可变区序列是Vκ1‑39/Jκ序列；(ii)具有包括未经重排的人VH基因区段、人D基因区段和人JH基因区段的种系，所述未经重排的人VH基因区段可操作地连接至鼠CH区并且包含选自VH2‑5、VH3‑23和VH3‑30的人VH基因区段；和(iii)包含B细胞群，其中所述群中的每个B细胞表达来源于经重排的人Vκ1‑39/Jκ序列的人免疫球蛋白轻链可变结构域，并且其中所述B细胞群包含至少一个表达来源于选自VH2‑5、VH3‑23和VH3‑30的人VH基因区段的人免疫球蛋白重链可变结构域的B细胞；(b)表达包含可变结构域的第二人免疫球蛋白重链，所述可变结构域由来源于第二遗传工程小鼠的B细胞的第二人免疫球蛋白重链可变区编码，所述第二遗传工程小鼠已用包含第二表位的第二目标抗原免疫，并且所述第二遗传工程小鼠：(i)具有对于可操作地连接至鼠Cκ区的单一的经重排的人免疫球蛋白轻链可变区序列是纯合或杂合的种系，所述人免疫球蛋白轻链可变区序列是Vκ1‑39/Jκ序列；(ii)具有包括未经重排的人VH基因区段、人D基因区段和人JH基因区段的种系，所述未经重排的人VH基因区段可操作地连接至鼠CH区并且包含选自VH2‑5、VH3‑23和VH3‑30的人VH基因区段；和(iii)包含B细胞群，其中所述群中的每个B细胞表达来源于经重排的人Vκ1‑39/Jκ序列的人免疫球蛋白轻链可变结构域，并且所述B细胞群包含至少一个表达来源于选自VH2‑5、VH3‑23和VH3‑30的人VH基因区段的人免疫球蛋白重链可变结构域的B细胞；以及(c)将所表达的包含由第一人免疫球蛋白重链可变区编码的可变结构域的第一人免疫球蛋白重链与人免疫球蛋白轻链配对以及与所表达的同样与所述人免疫球蛋白轻链配对的第二人免疫球蛋白重链配对，所述第二人免疫球蛋白重链包含由第二人免疫球蛋白重链可变区编码的可变结构域，从而制备双特异性抗原结合蛋白。