[发明专利]一种蛋白质类泛素化修饰的检测方法及其应用在审
| 申请号： | 201310752040.7 | 申请日： | 2013-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN104749143A | 公开（公告）日： | 2015-07-01 |
| 发明（设计）人： | 张春阳;杨用 | 申请（专利权）人： | 深圳先进技术研究院 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64;G01N1/28;C12N15/63;C12N15/85;C12N15/66 |
| 代理公司： | 广州三环专利代理有限公司 44202 | 代理人： | 郝传鑫;熊永强 |
| 地址： | 518055 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种蛋白质类泛素化修饰的检测方法，该方法将表达待测蛋白质的重组质粒以及表达带四半胱氨酸多肽标签的类泛素化修饰蛋白的重组质粒共转染宿主细胞进行蛋白质的类泛素化修饰，然后进行蛋白质纯化、双砷染料标记、并对待测蛋白质的类泛素化修饰进行检测和待测蛋白质的多聚类泛素化修饰的修饰程度进行量化分析；该方法灵敏度高，简单易行。此外，本发明还提供了一种蛋白质类泛素化修饰的检测质粒及其制备方法；另外，本发明还提供了一种蛋白质类泛素化修饰的检测试剂盒。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 蛋白质 类泛素化 修饰 检测 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种蛋白质类泛素化修饰的检测方法，其特征在于，包括以下步骤： （1）提供重组质粒，包括待测蛋白质表达质粒和检测质粒， 其中，所述待测蛋白质表达质粒具有待测蛋白质的编码基因，所述检测质粒含有相连的类泛素化修饰蛋白的编码基因和四半胱氨酸多肽标签的编码基因，所述四半胱氨酸多肽标签的编码基因位于类泛素化修饰蛋白的编码基因的5’端，所述四半胱氨酸多肽标签的编码基因为18bp～36bp， 所述四半胱氨酸多肽标签的氨基酸序列包括CCXXCC，其中，所述C为半胱氨酸，所述X为除半胱氨酸以外的任一氨基酸， 所述待测蛋白质为类泛素化修饰蛋白作用的底物蛋白； （2）将所述待测蛋白表达质粒和检测质粒在细胞内共表达，得到经类泛素化修饰的待测蛋白质； （3）纯化经类泛素化修饰蛋白修饰的待测蛋白质； （4）采用双砷荧光染料对纯化后的经类泛素化修饰的待测蛋白质进行荧光标记； （5）对荧光标记的经类泛素化修饰的待测蛋白质进行检测和/或量化分析。
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