[发明专利]一种利用间接免疫荧光检测猪瘟活疫苗病毒含量的方法

摘要

本发明属于生物检疫的技术领域，具体的涉及一种利用间接免疫荧光检测猪瘟活疫苗病毒含量的方法。该种利用间接免疫荧光检测猪瘟活疫苗病毒含量的方法，包括如下步骤：(1)准备传代细胞；(2)测定猪瘟活疫苗在传代细胞中的病毒含量；(3)荧光染色接毒细胞。该方法通过用间接免疫荧光检测活疫苗在传代细胞中病毒，以达到快速准确、简单有效的检测出猪瘟活活疫苗病毒含量的目的。

主权项

一种利用间接免疫荧光检测猪瘟活疫苗病毒含量的方法，包括如下步骤：(1)准备传代细胞将长满单层的细胞，用EDTA一胰酶消化分散，利用血清浓度为0.5%的细胞培养液终止消化，按照1:1传代比例获得传代细胞悬液，将细胞悬液铺96孔细胞培养板，每孔50uL；(2)测定猪瘟活疫苗在传代细胞中的病毒含量取4℃预冷细胞基础培养液，在冰盒上将猪瘟活疫苗进行10倍的倍比稀释，将不同稀释度的病毒悬液加入到（1）中96孔细胞培养板上的细胞悬液中，置于37℃温箱中吸附，2h后取出，每孔补加含1.5～2倍血清浓度的细胞培养液，每孔100uL，将培养板重新置于培养箱中培养72h，同时设立不接毒正常细胞对照；(3)荧光染色接毒细胞①将细胞培养板从培养箱中取出，弃去培养板孔内液体，用PBS洗涤2～3次，每次2～3min，并轻轻甩干；②加入‑20℃下预冷的甲醇，在4℃条件下固定20～30min；③弃去甲醇，室温下自然挥干5min，PBS洗涤2～3次，每次2～3min，并轻轻甩干；④加入PBS稀释的猪瘟阳性血清一抗，在37℃条件下吸附50min；⑤弃去猪瘟阳性血清一抗，PBS洗涤2～3次，每次2～3min，并轻轻甩干；⑥加入PBS稀释的兔抗猪荧光二抗，在37℃下吸附40min；⑦弃去兔抗猪荧光二抗，PBS洗涤2～3次，每次2～3min；⑧置于荧光显微镜下观察荧光情况，判定猪瘟活疫苗感染滴度。