[发明专利]一套高效铜抗性标记酿酒酵母表达系统及其应用

摘要

本发明公开了一套高效铜抗性标记酿酒酵母表达系统及其应用，包括一种铜离子敏感型酿酒酵母W303-1A cup1Δ及含有CUP1铜抗性筛选标记的酵母表达载体，本发明通过基因敲除酿酒酵母铜抗性基因cup1，获得一株铜离子敏感型酿酒酵母W303-1A cup1Δ，其对Cu2+的最低抑制浓度（SC培养基上）由1.2mM降为0.08mM；以pYX212载体为基本构架，以铜离子敏感型酿酒酵母为宿主菌，构建了以CUP1作为铜抗性标记的pYX212M酿酒酵母高效表达系统，并成功表达了绿色荧光蛋白基因（gfp），可用于酿酒酵母高效表达外源蛋白，拓宽了酿酒酵母的使用领域。

主权项

一套高效铜抗性标记酿酒酵母表达系统，其特征在于包括一种铜离子敏感型酿酒酵母W303‑1Acup1及含有CUP1铜抗性筛选标记的酵母表达载体，所述酿酒酵母W303‑1Acup1的构建方法为：以质粒pFA6a‑His3Mx6为模板，设计引物，PCR扩增出敲除片段P1‑his‑P2；将步骤1）获得的敲除片段醋酸锂转化进入野生型酿酒酵母W303‑1A，得到铜离子敏感型酿酒酵母W303‑1Acup1；所述含有CUP1铜抗性筛选标记的构建方法为：以野生酿酒酵母为模版，设计引物，扩增出cup1基因；将步骤3）获得的cup1基因连接到酵母表达载体上。