[发明专利]一种体外扩增γδT细胞的方法

摘要

本发明涉及γδT细胞培养方法，具体涉及一种体外扩增γδT细胞的方法，该方法的操作步骤如下：抗TCRγδ抗体和CD28McAb预先包被T75培养瓶，备用。分离患者外周血单个核细胞（PBMC），用含5%自体血浆的无血清培养基将PBMC浓度调整为1×10⁶/ml，再将PBMC细胞悬液转入T75培养瓶中，加入含有适当浓度Zoledronat，HSP70，Toll-like Receptors7(TLR7)配体、左旋咪唑（Levamisole，LMS）、IL-2，IL-7，IL-15的初始培养基，37℃、5%CO₂的饱和湿润环境中培养，根据细胞的生长情况，每2～3天更换培养基，将细胞浓度控制在2.5×10⁶/ml左右，同时全量补充Zoledronat，HSP70，Toll-like Receptors7(TLR7)配体、左旋咪唑（Levamisole，LMS）、IL-2和IL-7，IL-15，持续培养12～16天后，即可获得大量较高纯度的γδT细胞。

主权项

一种体外扩增γδT细胞的方法，用抗TCRγδ抗体和CD28McAb预先包被T75培养瓶以备用；其特征在于该方法由以下步骤组成：将外周血单个核细胞转入包被的T75培养瓶中，加入含有浓度为1.00μg/ml～3.87μg/ml的唑来膦酸、10μg/ml～50μg/ml的HSP70、0.1μg/ml～10μg/ml的TLR7配体、0.1μg/ml～5.0μg/ml的左旋咪唑、10ng/ml的IL‑7、50ng/ml的IL‑15和1000IU/ml的IL‑2的无血清培养基，放入二氧化碳培养箱培养12～16天后获得大量较高纯度的γδT细胞。