[发明专利]一种检测自噬信号通路的试剂、PCR检测方法及其应用

摘要

本发明提供了一种检测细胞内自噬信号通路的试剂、PCR检测方法及其应用，本发明所述检测试剂包括检测AKT1基因、AMBRA1基因、APP基因、ATG10基因、ATG12基因等84个基因的PCR反应引物和内参GAPDH控制基因、ACTB控制基因、B2M控制基因。本发明将涉及自噬信号分子集中在一个平板上，通过做一次实时荧光定量PCR反应，反应细胞的生存状态，与正常的肺癌、肺细胞做对比，探讨自噬信号通路在肿瘤/正常细胞中的可能途径，为研究关键蛋白的调控提供最直接的证据；本发明从转录水平快速准确的找到自噬信号通路相关分子，为抗癌药物筛选、新靶向药物的机制探讨等提供了有力的工具。

主权项

一种检测细胞自噬信号通路的试剂，其特征在于它包括以下引物：（1）检测AKT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CACAAACGAGGGGAGTACAT‑3'；5'‑GCCATCATTCTTGAGGAGGAAG‑3'；（2）检测AMBRA1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGGGGAGGTTAGGATTTGGG‑3'；5'‑GAGCCGTAGGGTGGAAAG‑3'；（3）检测APP基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCCCTGCGGAATTGACAA‑3'；5'‑CCATCTGCATAGTCTGTGTCT‑3'；（4）检测ATG10基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATAAGATGCGACTGCTACAGG‑3'；5'‑CAATGCTCAGCCATGATGTGA‑3'；（5）检测ATG12基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TAGAGCGAACACGAACCATC‑3'；5'‑CACTGCCAAAACACTCATAGAG‑3'；（6）检测ATG16L1基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCTGGGACATTCGATCAGAGA‑3'；5'‑CCTTTCTGGGTTTAAGTCCAG‑3'；（7）检测ATG16L2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACCTGCGTGTCAGCAACA‑3'；5'‑CAGCTTTGGTCCAGTCAGAA‑3'；（8）检测ATG3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GATGGCGGATGGGTAGATAC‑3'；5'‑TCTTCACATAGTGCTGAGCAAT‑3'；（9）检测ATG4A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CAGCGAATGAACATCCTAAACC‑3'；5'‑CAGTGGTTGTCACTTCTGG‑3'；（10）检测ATG4B基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGTTGGCGAAGGCAAGTC‑3'；5'‑CCACGTATCGAAGACAGCAA‑3'；（11）检测ATG4C基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACCCCAACAATTTCTCTGAAG‑3'；5'‑GTCCATACCAATCTCCTGCTTT‑3'；（12）检测ATG4D基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCAGCCCACTGTGGATGT‑3'；5'‑AAGCCCACGGTACAGCTT‑3'；（13）检测ATG5基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGAAGCTGTTTCGTCCTGTG‑3'；5'‑AGGTGTTTCCAACATTGGCT‑3'；（14）检测ATG7基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATGATCCCTGTAACTTAGCCC‑3'；5'‑CACGGAAGCAAACAACTTCAA‑3'；（15）检测ATG9A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGTTTCTCAATGAATGGAGCCT‑3'；5'‑AAGTTAGCGATGCCAATCCA‑3'；（16）检测ATG9B基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGTGCTCACCGTCTACGA‑3'；5'‑GGGAGGTAGTGCATGTGG‑3'；（17）检测BAD基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCCAGAGTTTGAGCCGAGT‑3'；5'‑CCCATCCCTTCGTCGTCC‑3'；（18）检测BAK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CATCAACCGACGCTATGACT‑3'；5'‑GTCAGGCCATGCTGGTAGA‑3'；（19）检测BAI1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACAACCTGGTTCTCAGCATC‑3'；5'‑GGACGGTCGTGTTCCTCT‑3'；（20）检测BCL2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATGTGTGTGGAGAGCGTCAAC‑3'；5'‑TGAGCAGAGTCTTCAGAGACAGC‑3'；（21）检测BCL2L1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GACTGAATCGGAGATGGAGAC‑3'；5'‑GCAGTTCAAACTCGTCGCC‑3'；（22）检测BECN1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACCTCAGCCGAAGACTGAA‑3'；5'‑AACAGCGTTTGTAGTTCTGAC‑3'；（23）检测BID基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATGGACCGTAGCATCCCTC‑3'；5'‑GTAGGTGCGTAGGTTCTGG‑3'；（24）检测BNIP3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGAGTCTGGACGGAGTAGCT‑3'；5'‑CCCTGTTGGTATCTTGTGGTG‑3'；（25）检测CASP3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGAGGGGATCGTTGTAGAAGT‑3'；5'‑ACAGTCCAGTTCTGTACCAC‑3'；（26）检测CASP8基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCATGGACCACAGTAACATGG‑3'；5'‑AGTGAACTGAGATGTCAGCTCA‑3'；（27）检测CDKN1B基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TAATTGGGGCTCCGGCTAAC‑3'；5'‑TGCAGGTCGCTTCCTTATTC‑3'；（28）检测CDKN2A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATGGAGCCTTCGGCTGAC‑3'；5'‑GTAACTATTCGGTGCGTTGG‑3'；（29）检测CLN3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCTGTCGCATCCGTTTCA‑3'；5'‑CGATGTTGTGGAAGGTGTTC‑3'；（30）检测CTSB基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGAGTTATGTTTACCGAGGACC‑3'；5'‑GATGCAGATCCGGTCAGAG‑3'；（31）检测CTSD基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATTCAGGGCGAGTACATGATC‑3'；5'‑CGACACCTTGAGCGTGTA‑3'；（32）检测CTSS基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGTAGATGCGCGTCATCCTT‑3'；5'‑CCAACCACAAGTACACCATGA‑3'；（33）检测CXCR4基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACGTCAGTGAGGCAGAT‑3'；5'‑GATGACTGTGGTCTTGA‑3'；（34）检测DAPK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GAGTTTGTCGCTCCTGAGATAG‑3'；5'‑GCTTAGTGTCTCCAAGAAATGG‑3'；（35）检测DRAM1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGTGCTTGGATTGGTGGGAT‑3'；5'‑GATGGACTGTAGGAGCGTGT‑3'；（36）检测DRAM2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TACGGGTGGAAGCCAATTTA‑3'；5'‑AGCCGTGTTCGTTCATTGTT‑3'；（37）检测EIF2AK3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGAAACGAGAGCCGGATTTAT‑3'；5'‑ACTATGTCCATTATGGCAGCTT‑3'；（38）检测EIF4G1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AAGAGGCTCGGGACATAG‑3'；5'‑GACAAAGGCACTCAAGGGAC‑3'；（39）检测ESR1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GAAAGGTGGGATACGAAAAGAC‑3'；5'‑GCTGTTCTTCTTAGAGCGTTTG‑3'；（40）检测FADD基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGAGAAGGAGAACGCAACAG‑3'；5'‑GCTGAACCTCTTGTACCAGGT‑3'；（41）检测FAS基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGATTGTGTGATGAAGGACATG‑3'；5'‑TGTTGCTGGTGAGTGTGCAT‑3'；（42）检测GAA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGCCCTCGCAGTATATCACA‑3'；5'‑GAGACCCGTAGAGGTTCGC‑3'；（43）检测GABARAP基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGAAGAGCATCCGTTCGAGA‑3'；5'‑CCAGGTCTCCTATCCGAGCT‑3'；（44）检测GABARAPL1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATGAAGTTCCAGTACAAGGAGG‑3'；5'‑GCTTTTGGAGCCTTCTCTACAA‑3'；（45）检测GABARAPL2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGGTCTCAGGCTCTCAGATT‑3'；5'‑ACAGGAAGATCGCCTTTTCAG‑3'；（46）检测HDAC1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CGCCCTCACAAAGCCAAT‑3'；5'‑CTGCTTGCTGTACTCCGAC‑3'；（47）检测HDAC6基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACCCCAGTGTCCTCTATTTCT‑3'；5'‑CCTGGTTCCAAGGCACATTG‑3'；（48）检测HGS基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GAGACAGAAGTCCACGTACAC‑3'；5'‑CGGTTGAGATACCGTGCGA‑3'；（49）检测HSP90AA1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCTTGACCAATGACTGGGAA‑3'；5'‑AGCTCCTCACAGTTATCCATG‑3'；（50）检测HSPA8基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATGCCAAACGTCTGATTGGA‑3'；5'‑AGCATCATTCACCACCATAAAGG‑3'；（51）检测HTT基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGCTCACCGCTGCTAAGG‑3'；5'‑ACATCCGATCTCGATTCAGAGT‑3'；（52）检测IFNA1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCCTCGCCCTTTGCTTTAC‑3'；5'‑CTGTGGGTCTCAGGGAGATC‑3'；（53）检测IGF1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCTCTTCAGTTCGTGTGTGG‑3'；5'‑CGACTGCTGGAGCCATAC‑3'；（54）检测INS基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCAGCCTTTGTGAACCAACA‑3'；5'‑CCCCGCACACTAGGTAGAG‑3'；（55）检测IRGM基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCTCACCTCCTACTGAGCT‑3'；5'‑GTTTTGGCAAGCATCACATGAT‑3'；（56）检测LAMP1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CAGATGTGTTAGTGGCACCC‑3'；5'‑TTGGAAAGGTACGCCTGGAT‑3'；（57）检测MAP1LC3A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AACATGAGCGAGTTGGTCAA‑3'；5'‑GCTCGTAGATGTCCGCGA‑3'；（58）检测MAP1LC3B基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AAGGCGCTTACAGCTCAAT‑3'；5'‑CTGGGAGGCATAGACCATG‑3'；（59）检测MAPK14基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTGTTGGACGTTTTTACACCTG‑3'；5'‑AGACCTCGGAGAATTTGGTAG‑3'；（60）检测MMP2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GATACCCCTTTGACGGTAAGG‑3'；5'‑CCTTCTCCCAAGGTCCATAG‑3'；（61）检测MTOR基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCAGATTTGCCAACTATCTTCG‑3'；5'‑CAGCGGTAAAAGTGTCCCCT‑3'；（62）检测NOS3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGATGGCGAAGCGAGTGAA‑3'；5'‑ACTCATCCATACACAGGACC‑3'；（63）检测NPC1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTCTCCGAGTACACTCCCAT‑3'；5'‑CGCAGTAATGAAGACCAGCG‑3'；（64）检测PIK3C3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTCTGGCCTAATGTAGAAGCA‑3'；5'‑GGCAAGACGGCTCATCTGA‑3'；（65）检测PIK3CG基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AACACCGACCTCACAGTTTT‑3'；5'‑CTCAAGCCACACATTCCACA‑3'；（66）检测PIK3R4基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCTCTTTAGGCAGTATGTGC‑3'；5'‑GATGTCCCCATGACGAACTC‑3'；（67）检测PROK2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTGACAAGGACTCCCAATGT‑3'；5'‑TGACCCAGATACTGACAGCA‑3'；（68）检测RAB24基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCTGGGTGAAGGAACTGC‑3'；5'‑ACTGACGTAATCCTCTGCCA‑3'；（69）检测RAB24基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCTGGGTGAAGGAACTGC‑3'；5'‑ACTGACGTAATCCTCTGCCA‑3'；（70）检测RB1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TTGGATCACAGCGATACAAACT‑3'；5'‑AGCGCACGCCAATAAAGACA‑3'；（71）检测RGS19基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGCGCAGTCTTTTGACAAG‑3'；5'‑GCCTTCTCGTCTACCACATG‑3'；（72）检测RPS6KB1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGAACTTCTGGCTCGAAAG‑3'；5'‑CGACAGGTGTCTGACGTGTA‑3'；（73）检测SNCA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AAGAGGGTGTTCTCTATGTAGG‑3'；5'‑GCTCCTCCAACATTTGTCACT‑3'；（74）检测SQSTM1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AAGCCGGGTGGGAATGTT‑3'；5'‑CCTGAACAGTTATCCGACTCCA‑3'；（75）检测TGFB1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGCCAGATCCTGTCCAAG‑3'；5'‑GTGGGTTTCCACCATTAGCA‑3'；（76）检测TGM2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CGTGACCAACTACAACTCG‑3'；5'‑CATCCACGACTCCACCCA‑3'；（77）检测TMEM74基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AAATAACAGCGGAACGGAAAG‑3'；5'‑CTTGGGACCACTCATTTGGAT‑3'；（78）检测TNF基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCTCTCTCTAATCAGCCCTCT‑3'；5'‑GAGGACCTGGGAGTAGATGA‑3'；（79）检测TNFSF10基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGTGAGAGAAAGAGGTCCTCA‑3'；5'‑CCAGAGCCTTTTCATTCTTGG‑3'；（80）检测TP53基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GAGGTTGGCTCTGACTGTAC‑3'；5'‑CCGTCCCAGTAGATTACCA‑3'；（81）检测ULK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCAGAGCAACATGATGG‑3'；5'‑CCTTCCCGTCGTAGTGCT‑3'；（82）检测ULK2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTGGTATTCGCATCAAAATAGC‑3'；5'‑CACAAGTCAGCCTTAGCATCAT‑3'；（83）检测UVRAG基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTTGGGTCAGCAGATTCATG‑3'；5'‑CATCGTAAGAATTGCGAACACA‑3'；（84）检测WIPI1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AACAGGTCTATGTGCTCTCTC‑3'；5'‑CTCATGGGCAGCAATAGTG‑3'。