[发明专利]甘蔗梢腐病病原菌小种gx1的分子检测方法

摘要

本发明涉及一种甘蔗梢腐病病原菌（Fusarium moniliforme）小种gx1的分子检测方法，包括引物和探针设计、提取甘蔗梢腐病病原菌小种gx1的DNA、建立qPCR检测的反应体系、qPCR检测的反应程序和qPCR检测结果。本发明采用Taqman探针的实时定量PCR检测方法，具有灵敏度高，特异性好，所需要的DNA用量少的特点，较常规半定量PCR检测的灵敏度高1,000倍，可以直接从甘蔗发病的叶片中检测到病原菌，减少了病原菌的分离、纯化和培养过程，可用于田间对甘蔗梢腐病病原菌小种gx1诊断及检测，节省时间和经费。

主权项

一种利用分子检测方法检测甘蔗梢腐病病原菌小种gx1的引物和探针组合FAM‑gx1，其特征在于所述引物和探针组合为下列6个组合中的1个组合：FAM‑gx1第1组：引物：FAM‑gx1‑F1：5’‑CCTGATCCGAGGTCAACATTC‑3’FAM‑gx1‑R1：5’‑TCGAGCTTCCATAGCGTAGTA‑3’探针：FAM‑gx1‑P1：5’‑CATGGCCGCGACGATTACCAGTAA‑3’；FAM‑gx1第二组：引物：FAM‑gx1‑F2：5’‑TGCTTAAGTTCAGCGGGTATT‑3’FAM‑gx1‑R2：5’‑GTCACGTCGAGCTTCCATAG‑3’探针：FAM‑gx1‑P2：5’‑CATGGCCGCGACGATTACCAGTAA‑3’；FAM‑gx1第三组：引物：FAM‑gx1‑F3：5’‑CGATTACCAGTAACGAGGGTTT‑3’FAM‑gx1‑R3：5’‑CCTGTTCGAGCGTCATTTCA‑3’探针：FAM‑gx1‑P3：5’‑TACTACGCTATGGAAGCTCGACGTGA‑3’；FAM‑gx1第四组：引物：FAM‑gx1‑F4：5’‑CTGTTCGAGCGTCATTTCAAC‑3’FAM‑gx1‑R4：5’‑GACGATTACCAGTAACGAGGG‑3’探针：FAM‑gx1‑P4：5’‑CGCGAGTCCCAACACCAAGC‑3’；FAM‑gx1第五组：引物：FAM‑gx1‑F5：5’‑CGCAATGTGCGTTCAAAGAT‑3’FAM‑gx1‑R5：5’‑ACAACGGATCTCTTGGTTCTG‑3’探针：FAM‑gx1‑P5：5’‑TTTGCTGCGTTCTTCATCGATGC‑3’；FAM‑gx1第六组：引物：FAM‑gx1‑F6：5’‑TGGGCTTGAGGGTTGAAATG‑3’FAM‑gx1‑R6：5’‑TCGATGAAGAACGCAGCAAA‑3’探针：FAM‑gx1‑P6：5’‑AATCTTTGAACGCACATTGCGCCC‑3’；所述Taqman探针的5’端、3’端分别用FAM报导荧光染料和BHQ‑1淬灭基团标记。