[发明专利]生产丙酮酸的菌株及其构建方法有效
| 申请号： | 201310653141.9 | 申请日： | 2013-12-04 |
| 公开（公告）号： | CN103882045A | 公开（公告）日： | 2014-06-25 |
| 发明（设计）人： | 张学礼;张冬竹 | 申请（专利权）人： | 合肥百迈生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21 |
| 代理公司： | 合肥诚兴知识产权代理有限公司 34109 | 代理人： | 汤茂盛 |
| 地址： | 230088 安徽省合肥市*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种生产丙酮酸的菌株及其构建方法，其构建方法如下：将D-氨基酸氧化酶基因DAAO通过EcoRI或BamHI克隆在pUC57质粒中获得质粒pUC57-DAAO，以质粒pUC57-DAAO为模板进行基因扩增，将基因DAAO扩增获得的产物克隆至质粒pET28a或pET21a中，选取培养得到质粒中连接上含有DAAO的DNA片段的阳性克隆质粒，将上述构建好的阳性克隆质粒转化进表达宿主菌BL21(DE3)中，选取培养得到能够将D-丙氨酸转化为丙酮酸的第一菌株；D-氨基酸氧化酶基因DAAO片段大小为1124bp，含有核酸内切酶NdeI和EcoRI的酶切位点。上述构建得到的菌株能够直接通过生物转换法将D-丙氨酸转化为丙酮酸。 | ||
| 搜索关键词： | 生产 丙酮酸 菌株 及其 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种生产丙酮酸菌株的构建方法，其构建方法如下：将D‑氨基酸氧化酶基因DAAO通过EcoRI或BamHI克隆在pUC57质粒中获得质粒pUC57‑DAAO，以质粒pUC57‑DAAO为模板进行基因扩增，将基因DAAO扩增获得的产物克隆至质粒pET28a或pET21a中，选取培养得到质粒中连接上含有DAAO的DNA片段的阳性克隆质粒，将上述构建好的阳性克隆质粒转化进表达宿主菌BL21(DE3)中，选取培养得到能够将D‑丙氨酸转化为丙酮酸的第一菌株；D‑氨基酸氧化酶基因DAAO片段大小为1124bp，含有核酸内切酶NdeI和EcoRI的酶切位点。
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