[发明专利]一种活体提取缢蛏DNA的方法

摘要

本发明公开的一种活体提取缢蛏DNA的方法，其包括如下步骤：1）缢蛏出水管组织的剥离；2）出水管组织基因组DNA的提取；3)提取DNA的检测。采用本发明方法是从缢蛏能够再生的出水管组织中提取DNA，从而避免杀死缢蛏或者影响缢蛏的生长发育。采用本发明方法提取缢蛏的DNA可以检测其基因型，在缢蛏科研和育种中具有重要的应用价值。在家系培育中，亲本十分珍贵，对亲本的伤害影响其生产性能的考察和种质利用。采用本发明方法可以检测家系亲本的基因型，从而预测子代的生产性能，筛选家系，提高缢蛏育种效率。

主权项

一种活体提取缢蛏DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：1）缢蛏出水管组织的剥离：1.1）把待取组织的缢蛏放入水温20‑30℃的海水培养桶内暂养，并在缢蛏外壳粘上带号码的标记；1.2）需要提取DNA时，将待取组织的缢蛏放置在冰上，麻醉待其出水管伸出后用剪刀剪取缢蛏出水管，长度为0.3‑1.0cm，放入相应的第一离心管并记好编号；2）出水管组织基因组DNA的提取：往收集在离心管中的出水管组织中加入DNA提取液，涡旋离心15‑30s，加入DNA提取液1/10倍体积的l20mg/ml蛋白酶K，震荡混匀，在56℃放置，直至组织完全溶解得到第一溶液；3）向第一溶液中加入DNA提取液1.0‑1.2倍体积的苯酚溶液翻转使其充分混匀的第二溶液；将所得的第二溶液放入离心机以10000‑12000rpm离心10‑20min得到第一上清液，将第一上清液转移到第二离心管；4）加入等体积的氯仿/异丙醇混合溶液，充分混匀后放入离心机10000‑12000rpm离心10‑20min得到第二上清液；所述氯仿/异丙醇混合溶液中氯仿与异丙醇的体积比为24:1；之后向第二上清液中加入两倍体积的‑20℃无水乙醇；以10000‑12000rpm离心10‑20min后用75%乙醇洗涤2次，倒掉离心管中液体，室温晾干得到晾干物；加入40‑120μl无菌水，4℃冰箱内过夜溶解。5)提取DNA的检测：用1.0%的琼脂糖凝胶检测DNA片段大小，DNA大分子条带清晰。分光光度计显示所得DNA的浓度在50‑3000ng/μl，OD260/OD280在1.7‑1.9。