[发明专利]一种基于T细胞表位筛查低乳糜泻毒性小麦品种的方法

摘要

一种基于T细胞表位筛查低乳糜泻毒性小麦品种的方法，具体包括两步法分离提取小麦麸质蛋白、SDS-PAGE电泳结合PageBlueTM染色法鉴定麸质蛋白，以及免疫印迹法检测麸质蛋白致乳糜泻T细胞表位等步骤。本发明通过基于T细胞表位的筛选方法，能够筛查出低乳糜泻毒性小麦品种，可从原料这一源头开始为乳糜泻患者提供安全可靠的低麸质食品，降低乳糜泻患者的安全风险。

主权项

一种基于T细胞表位筛查低乳糜泻毒性小麦品种的方法，其特征是按如下步骤：（1）麸质蛋白的提取和鉴定a）麸质蛋白的提取：选取各品种小麦仁研钵研磨成细粉，倒入离心管中，用于提取麸质蛋白；第一次抽提，用 50%（v/v）的异丙醇抽提，超声震荡10min后，涡旋混匀30min，10000rpm离心10min，收集上清液，保留沉淀；第二次抽提，每管沉淀加入0.5ml 50%异丙醇/1%DTT/50mM Tris pH 7.5，超声震荡10min，60℃加热30min，每5‑10 min混匀一次，10000rpm 离心10min，收集上清液，弃沉淀，将两次的上清液合并，14000rpm离心1min，得上清液，即为总的麸质蛋白；b）麸质蛋白的鉴定：采用常规SDS‑PAGE电泳，用10%的分离胶和4%的浓缩胶进行蛋白分离，用PageBlueTM对麸质蛋白进行染色过夜，凝胶成像；（2）致乳糜泻T细胞表位的鉴定a）按常规方法将电泳分离的小麦麸质蛋白转印到硝酸纤维脂膜上，取出膜，超纯水冲洗3次，MemCodeTM 染色试剂盒染色，凝胶成像后脱色；b）以基于T细胞表位的Glia‑α9单抗和Glia‑α20单抗为一抗，按照常规方法做免疫印迹，BCIP/NBT显色，Quantity One软件分析；c）通过灰度扫描比较T细胞表位含量的高低，评估小麦品种乳糜泻毒性强弱。