[发明专利]一种制备CD44基因缺陷小鼠诱导多能干细胞的方法

摘要

本发明具体公开了一种高效制备CD44基因缺陷小鼠诱导多能干细胞（IPSC）的方法。本发明首先利用TSA对小鼠成纤维细胞（MEF）进行预处理，然后再对MEF进行诱导重编程，IPSC的效率可以随着TSA的浓度升高而被提高。在挑取克隆前，将诱导后的MEF、未完全重编程、IPSC等细胞混合物，传代接种到包被有基质胶或基质膜的培养板上，IPSC的细胞比例可以提高100倍，克隆挑取的成功率提高了13.84%，增加了277.8倍。为提高IPSC的效率提供了新思路和新方法。

主权项

一种制备CD44基因缺陷小鼠诱导多能干细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.分离纯化获得CD44基因缺陷小鼠胚胎成纤维细胞；S2.将CD44基因缺陷小鼠胚胎成纤维细胞加入含有50～100nM 曲古抑菌素A的培养基中，培养24h；S3.诱导CD44基因缺陷小鼠胚胎成纤维细胞重编程，获得CD44基因缺陷小鼠诱导多能干细胞克隆；S3所述诱导CD44基因缺陷小鼠胚胎成纤维细胞重编程包括如下步骤：S31.包装携带有Oct4、Klf4、Sox2 3种重编程因子的逆转录病毒；S32.逆转录病毒感染CD44基因缺陷小鼠胚胎成纤维细胞；在体外培养10~15天，即可获得CD44基因缺陷小鼠诱导多能干细胞克隆；S3获得的CD44基因缺陷小鼠诱导多能干细胞克隆能通过传代培养来提高阳性克隆的挑取成功率；所述传代培养为：将S3诱导获得的CD44基因缺陷小鼠诱导多能干细胞克隆进行消化、传代一次后，接种到基质胶或基质膜包被的培养板上，待克隆长出后，挑选圆形或椭圆形、边缘清晰、凸起良好的克隆进行培养。