[发明专利]一种提取淡水鱼背侧肌肌球蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种提取淡水鱼背侧肌肌球蛋白的方法，属于水产品技术领域。本发明方法的步骤是先把活鱼放入装有新鲜清水的周转箱内静置1～2h；快速采取活鱼背侧肌；将鱼肉丁用冰水冲洗；再用缓冲溶液漂洗；最后制得肌球蛋白溶液。本发明在提取家鱼背侧肌肌球蛋白时通过消除组织蛋白酶L的影响，获得较高纯度的鱼肉肌球蛋白。

主权项

一种提取淡水鱼背侧肌肌球蛋白的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：（1）活鱼放入周转箱内静置1～2 h，周转箱中注入干净新鲜的自来水，注水量以没过鱼体为准，并不断向周转箱中充入氧气；（2） 将活鱼放在工作台上，从活鱼头背连接处开刀快速采取背侧肌，马上将采好的背侧肌置于冰水比w/v =1:5的冰水中漂洗10～20s，随即将鱼块捞出切成1～5cm×1～5cm×1～5cm鱼肉丁，此步骤时间控制在1 min 之内；（3） 将鱼肉丁置于干净滤网上，马上用冰水比w/v=1:5的冰水冲洗1～1.5 min；（4） 鱼肉丁于5～8倍、温度为0～4℃、pH值为7.2～7.6、20mmol/L的Tris‑HCl缓冲溶液中漂洗10～20 min；（5）将鱼肉丁组织捣碎，放在10倍体积的缓冲溶液 A中漂洗20 min，1000×g离心5‑15min；取出沉淀，放在沉淀5倍体积的缓冲溶液 B中悬浮，加ATP至终浓度为10mmol/L，2‑6℃下放置0.5‑1.5h，15000×g离心5‑15 min；上清液用5倍体积1Mmol KHCO3溶液稀释，放置10‑20min,12000×g 离心5‑15min；沉淀于5倍体积缓冲溶液 C中匀浆，放置5‑15min；再用3倍体积1mmol/LKHCO3溶液稀释，添加无水MgCl2至浓度为10mmol/L，2‑6℃下放置8‑12h；25000×g离心15‑25min；沉淀物用2倍体积的缓冲溶液 C溶解，得到肌球蛋白溶液；制备好的肌球蛋白溶液置于2‑6℃温度下；（6）测定肌球蛋白溶液组织蛋白酶L的活性和肌球蛋白溶液的浓度。