[发明专利]一种促使质粒发生连接反应的方法在审
| 申请号： | 201310536243.2 | 申请日： | 2013-11-04 |
| 公开（公告）号： | CN103757040A | 公开（公告）日： | 2014-04-30 |
| 发明（设计）人： | 刘军 | 申请（专利权）人： | 刘军 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 116000 辽宁*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种促使质粒发生连接反应的方法。步骤如下：首先准备好目标DNA，以及ＤＮＡ连接酶，将其胶回收后充分混匀；２１摄氏度条件下反应１２小时；在操作台中，将全部能量转化至大肠感觉的感受态细胞中；所述大肠感觉感受细胞态需要事先经过氯化钙溶液冲洗；冷浴３－５分钟；每隔１０分钟混合、振荡、分离、悬置；上述行为反复十次；用移液枪悬浮细胞，涂抹在琼脂平板上；1个小时后，倒置平板，在37摄氏度的条件下培养15小时，即得；用移液枪悬浮细胞之前需要保留上清液；最后可以用灭过菌的竹棒挑取目标质粒。本发明的有益效果是，成本较低、重复性好，转化效率低，而且可以比较完全的对比目的片段。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 促使 质粒 发生 连接 反应 方法 | ||
【主权项】：
一种促使质粒发生连接反应的方法，其特征在于，步骤如下：首先准备好目标DNA，以及ＤＮＡ连接酶，将其胶回收后充分混匀；２１摄氏度条件下反应１２小时；在操作台中，将全部能量转化至大肠感觉的感受态细胞中；所述大肠感觉感受细胞态需要事先经过氯化钙溶液冲洗；冷浴３－５分钟；每隔１０分钟混合、振荡、分离、悬置；上述行为反复十次；用移液枪悬浮细胞，涂抹在琼脂平板上；1个小时后，倒置平板，在37摄氏度的条件下培养15小时，即得。
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