[发明专利]一种简化的Sanger法基因测序方法

摘要

本发明属于生物技术领域，公开了一种简化的Sanger法基因测序方法。本发明以荧光定量PCR和核酸纯化技术为基础，对Sanger法基因测序技术进行大幅度改进，减少了sanger法基因测序流程和操作步骤，缩短了基因测序时间。本发明测序方法操作简单、安全，同时不需要较多昂贵试剂的使用，经济高效；本发明测序方法能有效缩短操作时间，测序过程可在4～6小时内完成；本发明的基因测序过程可以在96孔板或8连管中全部完成，不需要转移试管，从而能够有效防止污染。

主权项

一种简化的Sanger法基因测序方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）目的基因荧光定量PCR扩增：采用荧光定量聚合酶连反应，得到目的基因的荧光定量结果和PCR产物；（2）根据步骤（1）中的定量结果，对步骤（1）得到的PCR产物进行纯化并对纯化后的产物进行测序PCR反应：在步骤（1）得到的PCR产物中加入核酸外切酶Ⅰ和碱性磷酸酶，混合均匀后，再加入封闭液体，然后在封闭液体上加入测序引物、Bigdye和Bigdye缓冲液，运行PCR程序，得到测序PCR产物；（3）利用磁珠法对步骤（2）得到的测序PCR产物进行纯化，得到纯化后的测序PCR产物；（4）将步骤（3）纯化后的测序PCR产物加样至测序仪进行测序分析。