[发明专利]一种用于检测EGFR基因热点突变的试剂盒及其检测方法

摘要

本发明属于生物技术领域，公开了一种用于检测EGFR基因热点突变的试剂盒及其检测方法。本发明试剂盒包含PNA试剂，利用钳夹技术封闭野生型EGFR基因序列，从而提高sanger测序法的灵敏度和EGFR基因突变的检出率。本发明检测方法操作简单、安全，不需要较多昂贵试剂的使用，经济高效；同时还具有操作时间短的优点，整个检测过程可在4～6小时内完成。

主权项

一种用于检测EGFR基因热点突变的试剂盒，其特征在于，包括PCR反应液、PCR引物、探针、PNA试剂、酶消化液、测序反应液、磁珠和产物纯化液，所述PCR反应液包含PCR缓冲液、dNTPs和DNA聚合酶，所述PCR引物包括4对相互独立的引物，第一对引物的正向引物序列为SEQ.ID NO.1，反向引物序列为SEQ.ID NO.2，第二对引物的正向引物为SEQ.ID NO.3，反向引物为SEQ.ID NO.4，第三对引物的正向引物为SEQ.ID NO.5，反向引物为SEQ.ID NO.6，第四对引物的正向引物为SEQ.ID NO.7，反向引物为SEQ.ID NO.8；所述探针包括4组相互独立的探针，第一组探针的序列为SEQ.ID NO.9，第二组探针的序列为SEQ.ID NO.10，第三组探针的序列为SEQ.ID NO.11，第四组探针的序列为SEQ.ID NO.12，所述四组探针的5’端的荧光基团均为FAM，3’端的荧光基团均为BHQ1；所述PNA试剂包含五组相互独立的PNA试剂，第一组PNA试剂中PNA序列为SEQ.ID NO.13，第二组PNA试剂中PNA序列为SEQ.ID NO.14，第三组PNA试剂中PNA序列为SEQ.ID NO.15，第四组PNA试剂中PNA序列为SEQ.ID NO.16，第五组PNA试剂中PNA序列为SEQ.ID NO.17；所述测序反应液中含有Bigdye、Bigdye缓冲液和测序引物。