[发明专利]基于阻抗分析的气味结合蛋白传感器的制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种基于阻抗分析的气味结合蛋白传感器的制备方法及应用，本发明利用标准的MEMS工艺加工而成的平面叉指金电极阵列，使用硝酸纤维素膜处理叉指金电极表面，直接固定气味结合蛋白，获得所述阻抗传感器。利用阻抗和分子对接结合的分析方法，本发明将中华蜜蜂气味结合蛋白Acer-ASP2固定在叉指金电极上，用于花香物质和蜜蜂信息素的检测。本发明构建的电化学传感器可将气味结合蛋白稳定、简便地固定在叉指金电极表面，传感器检测灵敏度高，检测下限低，特异性强。

主权项

一种基于电化学阻抗分析的气味结合蛋白传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）加工叉指金电极阻抗传感器：以玻璃为基底，在玻璃上磁控溅射钛化钨薄膜作为粘附层，接着磁控溅射金薄膜作为电极层；用AZ光刻胶光刻出电极图形后，采用干法刻蚀将非电极区域刻蚀掉，得到叉指金电极，最后将芯片腔用环氧树脂胶封在玻璃基底上，制得叉指金电极阻抗传感器；（2）固定气味结合蛋白：首先，依次使用无水乙醇和超纯水超声清洗步骤1得到的叉指金电极阻抗传感器5 min，用氮气吹干；配制硝酸纤维素膜甲醇溶液，其中，硝酸纤维素膜的面积与甲醇溶液的体积比为1:5（单位：mm2/μl）；取15μl硝酸纤维素膜甲醇溶液均匀滴加在叉指金电极上，等待5 min甲醇挥发后，叉指金电极上形成一层用于固定蛋白的硝酸纤维素膜；之后，加入15 μl 的浓度为500 μg/ml 的气味结合蛋白溶液，其中气味结合蛋白选取的是中华蜜蜂气味结合蛋白Acer‑ASP2，溶剂为0.1M PBS缓冲液（pH=7.2，0.1M指的是PBS缓冲液中磷酸盐的摩尔浓度），室温下静止2h，使得中华蜜蜂气味结合蛋白Acer‑ASP2与硝酸纤维素膜作用后固定在硝酸纤维素膜上；从芯片腔的进/出液口以恒定的速率（20 μl/s）缓慢通入PBS缓冲液，PBS缓冲液流入腔体后从另一进出口流出，用于清洗未被固定的中华蜜蜂气味结合蛋白Acer‑ASP2，持续10 min后即可获得基于电化学阻抗分析的气味结合蛋白传感器，放在4℃条件下备用。