[发明专利]猪NLRC5基因全长克隆及表达量的荧光定量检测方法

摘要

本发明涉及猪NLRC5基因全长克隆及表达量的荧光定量检测方法，通过材料的处理与准备、RNA的提取cDNA合成、RT-PCR及3’RACE技术获得了NLRC5基因，该基因cDNA全长为6638bp，基因开放阅读框为5538bp,共编码1846个氨基酸。生物信息学分析发现猪NLRC5基因核苷酸序列与牛、绵羊、猕猴、人的同源性达到了80%左右。本发明通过优化实时荧光定量PCR反应体系参数，我们建立起了一种用于检测NLRC5基因表达量的SYBR Green I荧光定量方法，基于荧光定量PCR方法，首次对猪组织中的NLRC5基因表达进行了定量分析。

主权项

一种猪NLRC5基因全长序列克隆方法，其特征在于是运用人类、小鼠等物种NLRC5基因已知片段设计分段扩增的引物，用猪的小肠组织提取总RNA，进行RT‑PCR扩增，用扩增到的NLRC5基因片段作为已知序列，采用3’RACE技术，获得3’端未知序列，拼接获得其全长cDNA序列；利用Real‑time PCR技术检测NLRC5基因在不同组织中的表达量。