[发明专利]一种组织工程化软骨移植物及其制备方法

摘要

一种组织工程化软骨移植物及其制备方法，属于生物医学组织工程中利用生物活性诱导因子诱导分化骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）成软骨细胞复合支架材料构建组织工程化软骨的技术领域。组织工程化软骨移植物通过下述方法制备：(1)制备Nano-HA/PLLA软骨支架材料：(2)将BMSCs与Nano-HA/PLLA软骨支架材料共同培养，用成软骨诱导液将BMSCs诱导分化成软骨细胞，得到组织工程化软骨移植物。本发明，提高了软骨支架材料的柔韧性和生物降解性，改善生物力学性能，更加有利于骨细胞的粘附生长和血管化；在动物实验中已经证明能很好的修复软骨缺损。

主权项

一种组织工程化软骨移植物，包括支架材料和种子细胞，其特征在于，所述组织工程化软骨移植物是通过下述方法制备：(1)、Nano‑HA/PLLA软骨支架材料的制备：(a)、将Nano‑HA和PLLA按质量比1:4共同溶解于有机溶剂溶剂内，混合均匀，得到配制好的生物材料；(b)、通过RIPF工艺成形具有间隔的平行冰线，RIPF工艺的填充速度为20mm/s；(c)、将配制好的生物材料填入冰线间的间隔，将填了生物材料后的表面刮平，使得冰线和生物材料交替排列；(d)、在正交方向成形下一层冰线，重复步骤(b)和(c)；(e)、成形后，将冰和生物材料构成的实体拿到冷藏室，冰融化剩下的空间即为骨组织支架所需的纵横交错、彼此连通的大孔；(f)、将由生物材料构成多孔支架再放置在冻干机中冷冻干燥之后，得到Nano‑HA/PLLA软骨支架材料；(2)、组织工程化软骨移植物的构建：BMSCs传代至第3代后经含0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶消化后接种于Nano‑HA/PLLA软骨支架材料中在含FBS的H‑DMEM培养液内进行共培养；当细胞长满约50%～60%时，将培养基更换为加入了成软骨诱导液的不含FBS的H‑DMEM培养液，4天后首次更换培养基，以后每3‑4天更换培养基，共诱导两周，即得组织工程化软骨移植物；所述成软骨诱导液的组成为TGF‑β110μg/L、胰岛素6.25mg/L、丙酮酸钠1mmol/L、维生素C37.5mg/L、地塞米松10‑7mol/L、转铁蛋白6.25mg/L和亚硒酸6.25mg/L。