[发明专利]大蒜种质资源RAPD遗传多样性分析方法

摘要

本发明公开了一种大蒜种质资源RAPD遗传多样性分析方法，包括提取大蒜基因组DNA、检测DNA的浓度和纯度、RAPD随机引物的筛选、PCR扩增、PCR扩增产物的电泳检测以及条带信息分析等步骤；所述方法步骤简便、试剂相对便宜、扩提取效果优，重复性好。

主权项

一种大蒜种质资源RAPD遗传多样性分析方法，包括以下具体步骤：1)、提取大蒜基因组DNA；2)、检测DNA的浓度和纯度；3)、RAPD随机引物的筛选：以大蒜品种DNA为模板，对随机引物进行PCR扩增，凝胶成像后，选择出有多态性条带的引物，然后以所有大蒜品种DNA为模板进行PCR扩增，凝胶成像后，继续筛选条带清晰、不少于3条清晰条带、重复性好的引物；4)、PCR反应体系PCR反应总体积25μl，其中含模板DNA20‑80ng，引物5‑15pmol，dNTP5‑15μmol，Taq DNA聚合酶0.2‑2U，10xPCR反应缓冲液1.5‑3.5μl，以重蒸馏水补充至25μl；5)、PCR扩增程序退火温度为31.5‑40.5℃，循环次数为35‑45次；6)、PCR扩增产物的电泳检测在25μl PCR反应终产物中，取5μl样品，加溴酚蓝指示剂溶液1μl混合，在1.5％琼脂糖凝胶中电泳，电泳缓冲液为1×TAE，电泳电场强度为5V／cm，凝胶成像系统下观察拍照；7)、条带信息分析以蒜氨酸含量高的为优质大蒜种质对照，或以蒜氨酸含量低的为非优质大蒜种质对照，将需要筛选的大蒜种质经DNA提取、RAPD扩增获得的电泳谱图中条带与上述对照做聚类比较，如能与优质大蒜种质聚为一类或距离较近，该种质可以判断为优质种质，随后可以采用高效液相色谱法测定该种质蒜氨酸含量进行验证。