[发明专利]一种电化学发光测定皮层肌动蛋白的方法

摘要

本发明属于分析化学和电化学发光检测技术领域。本发明涉及一种皮层肌动蛋白的电化学发光传感器及皮层肌动蛋白的测定方法，利用电化学还原制备纳米金和石墨烯修饰金电极，并将带有活性基团联吡啶钌连接的肽自组装在修饰电极上，构成电化学发光传感器。在目标物皮层肌动蛋白存在时，皮层肌动蛋白与肽结合，阻止了嗜热菌蛋白酶对肽的切割，产生强的电化学发光信号；反之，无皮层肌动蛋白存在时，嗜热菌蛋白酶切割肽，电化学发光信号减弱。以此现象实现对皮层肌动蛋白的测定。本方法的特点是方法简单、灵敏度高、仪器设备简单、费用低。

主权项

一种电化学发光测定皮层肌动蛋白的方法，其特征在于通过测定电极表面标记肽的电化学发光信号的变化数据来获得皮层肌动蛋白的定量信息的方法；所述的分析方法包括以下步骤：（1）电化学发光探针传感器的构建：a 电化学还原纳米金和石墨烯修饰电极的制备：将金电极浸泡在0.1~2.0 mg/mL氧化石墨烯溶液中，在‑1.3 V电还原600 s，得石墨烯修饰电极；将所得的石墨烯修饰电极在5.0 mmol/L HAuCl4和0.5 mol/L KNO3混合溶液中于‑0.4 V电沉积300 s；b 电化学发光探针的制备：将2.0 mg肽溶解在10 mL无水乙醇中，然后向其中加入含5 mg的Ru‑NHS（羧基化的吡啶钌）溶液，在4摄氏度下搅拌孵育过夜；c 电化学发光探针传感器的构建：将纳米金和石墨烯修饰电极浸泡在50 μL的电化学发光探针溶液中，在4摄氏度下搅拌孵育过夜，洗涤后浸泡于100 μL 1.0×10‑3 M巯基己醇反应半小时后，再用pH 7.4磷酸缓冲溶液冲洗电极三次，得电化学发光探针传感器；（2） 电化学发光法检测皮层肌动蛋白： a 电化学发光探针传感器浸入100 μL含有中皮层肌动蛋白标准溶液或样品溶液中，在室温下反应，取出电极，用pH 7.4磷酸缓冲溶液冲洗电极三次，然后再将电极浸泡在含5%的Tween‑20溶液中孵育30分钟，然后取出电极，用pH 7.4磷酸缓冲溶液冲洗电极三次；b 将电极浸泡在50 μL含有嗜热菌蛋白酶溶液中反应10~200分钟，取出电极，用pH 7.4磷酸缓冲溶液冲洗电极三次，然后再将电极浸泡在含5%的Tween‑20溶液中孵育30分钟，然后取出电极，用pH 7.4磷酸缓冲溶液冲洗电极三次，以此电极为工作电极，进行电化学发光测定，根据电化学发光信号对皮层肌动蛋白进行定量测定。