[发明专利]一种测定黄曲霉毒素的方法

摘要

本发明公开了一种测定黄曲霉毒素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）待用液1的制备（2）待用液2的制备（3）制备HRP（辣根过氧化物酶）修饰的R1（4）制备HRP修饰的R2（5）黄曲霉毒素的检测。红色罗丹明B既不会引起浓度淬灭，也不会导致光强不足。云母粉末的加入使草酸酯发光体系的发光寿命显著延长。三联吡啶钌和化学发光具有检测灵敏度高、线性范围宽等优点，能够更加有效的检测黄曲霉毒素。本发明具有更低的毒性、更高的闪点和更低的蒸气压这些优良特性。通过检测液态奶中黄曲霉毒素的含量，并利用加标回收法得到回收率在98.4%-100.4%，表明此方法在测定黄曲霉毒素时具有良好的准确度。

主权项

一种测定黄曲霉毒素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）待用液1的制备：将将磁性金纳米粒子用磷酸缓冲液洗涤后，取 0.5×10^‑5 M的三联吡啶钌，加入250 μl pH 值为9‑10 的0.1×10^‑5 M 的硼酸钠缓冲溶液中，在37°C下反应15h；将所得的功能化磁性金纳米粒子用磷酸盐缓冲液洗涤，然后分散在磷酸盐缓冲液中，保存在5°C下备用；（2）待用液2的制备：将磁性金纳米粒子用磷酸缓冲液洗涤后，加入150 μl 2.0×10^‑5 M的双(2，4‑ 二硝基苯基) 草酸酯、1.0×10^‑5 M双(2，5‑ 二硝基苯基) 草酸酯、添加50 μl比例为0.06mg/μl 350目的母粉末和50 μl 0.5×10^‑5 M 的红色罗丹明B,在37°C下反应15h；将所得的功能化磁性金纳米粒子用磷酸盐缓冲液洗涤，然后分散在磷酸盐缓冲液中，保存在5°C下备用；（3）制备HRP（辣根过氧化物酶）修饰的R1：在100 μl 1.5×10^‑5 M的钼酸铵溶液、、80 μl 0.005M的EDTA和100 μl 0.008M的对苯二酚溶液中加入15 mg NHS（N‑羟基琥珀酰亚胺），在37 °C下搅拌2小时，然后加入150 μl HRP，在37 °C下搅拌24h；（4）制备HRP修饰的R2：在100 μl 1.5×10^‑5 M的3‑ 氯‑4 羟基乙酰苯胺、130 μl 0.5×10^‑5 M亚硫酸钠中加入15 mg NHS和30 μl 0.5×10^‑5 M的催化剂，在37 °C下搅拌1.5h，然后加入100 μl HRP，在37 °C下搅拌24h；（5）黄曲霉毒素的检测：取含黄曲霉毒素的标准溶液100 μL加入到200 μL的待用液1溶液，37°C反应40min，然后混合物在磁力架上分离，将上清液转移到待用液2溶液中；然后加入含有 2.5×10‑7 M HRP‑R1和 2.0×10‑7 M HRP‑R2溶液200 μL，在 37 ℃反应 2 h后进行磁分离，除去上清液，将磁珠用 120 μL磷酸缓冲溶液清洗两遍后，分散于1.0 ml磷酸缓冲溶液中，然后进行化学发光检测。