[发明专利]一种转基因猪筛选标记基因敲除的方法

摘要

本发明属于基因工程领域，本发明提供了一种转基因猪筛选标记基因敲除的方法，利用猪精子特异诱导启动子启动Cre/loxP位点特异重组酶系统，建立的自我剪切元件PCN，正常进行打靶筛选阳性克隆，进行SCNT获得founder阳性转基因猪后，通过配种，自我剪切敲除标记基因。其中剪切元件PCN中P代表猪精子特异启动子，C代表Cre酶基因，N代表打靶时所需的正筛选标记neo基因。由于Cre酶是在精子成熟时特异启动，因此后代即可获得敲除筛选标记neo基因的猪，因此方便的获得筛选标记基因敲除的猪。

主权项

一种转基因猪筛选标记基因敲除的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)构建自我剪切元件PCN；所述自我剪切元件PCN包括猪精子特异启动子、Cre重组酶基因和neo筛选标记基因；2)构建带有自我剪切元件的打靶载体；将步骤1)构建的自我剪切元件PCN替换于普通的打靶载体的正筛选基因当中，得到带有自我剪切元件的打靶载体；3)筛选阳性克隆细胞；4)体细胞克隆获得F0代阳性公猪；5)配种繁殖获得自动敲除标记基因的F1代个体。