[发明专利]金黄壳色三角帆蚌的培育方法

摘要

本发明涉及一种金黄壳色三角帆蚌的培育方法，特征是，包括以下步骤：（1）选择4～6三角帆蚌龄亲蚌；（2）取亲蚌的外套膜边缘组织，提取总RNA、合成单链cDNA，采用引物组合进行SRAP扩增，扩增产物电泳后选出具有金黄壳色特异条带序列的雌雄个体；（3）将选出的雌雄亲蚌建立家系，于流水池中培育；（4）定期检查母本的怀幼情况，发现有成熟钩介幼虫，将成熟的母本选出进行采苗，得到幼蚌；将幼蚌流水池进行培育至壳长1～2cm移入网箱中，网箱吊养于池塘中进行第二阶段幼蚌培育至壳长5～8cm；（5）剔除后代非金黄壳的家系亲蚌，将剩余的亲蚌建立金黄壳色核心繁育种群。本发明培育后代中金黄壳色的比例可达到99.0%以上，壳色遗传稳定、术后成活率高。

主权项

一种金黄壳色三角帆蚌的培育方法，其特征是，包括以下步骤：（1）选择喷水有力、腹部边缘柔软、贝壳完整的三角帆蚌4～6龄亲蚌，并鉴别雌雄；（2）取雌雄亲蚌的外套膜边缘组织50mg，采用柱式动物组织总RNA抽提纯化试剂盒提取总RNA；采用AMV第一链cDNA合成试剂盒合成单链cDNA；采用特定引物组合进行SRAP扩增，扩增产物经琼脂糖电泳后在紫外灯下观察，选出具有金黄壳色特异条带序列的雌雄个体，作为金黄壳色三角帆蚌品系繁育亲蚌；所述特定引物的基因序列为：正向引物为gactgcgtacgaattcga，反向引物为tgagtccaaaccggtcc；（3）将经步骤（2）选出的雌雄亲蚌建立1雌1雄或1雄多雌的家系，每组家系分别置于相互隔离的流水池中进行培育，流水池面积为1～2㎡，水位为15～25 cm，水流流速2～3 m/min；（4）定期检查各个家系中母本外鳃丝的怀幼情况，发现有成熟钩介幼虫，立即将成熟的母本选出，采用常规方法进行采苗，获得幼蚌；将每个家系的幼蚌分别置于相互隔离的流水池进行培育，水流流速1～4 m/min，幼蚌培育至壳长1～2cm移入网眼直径为2.5～3cm的网箱中，放养密度为200～300只/网箱，网箱底部铺设一层塑料薄膜，在网箱底部放置2～3cm厚黄泥，网箱吊养于池塘中进行第二阶段幼蚌培育，培育至壳长5～8cm，观察各个家系F1代幼蚌壳色表型，随机检查1000只F1代幼蚌壳色，若金黄壳色比例大于99%，表明亲蚌壳色基因型选择正确；（5）剔除后代非金黄壳的家系亲蚌，将通过步骤（4）验证的亲蚌建立金黄壳色核心繁育群体，作为金黄壳色三角帆蚌繁育的亲蚌，采用步骤（4）的方式进行繁育，得到金黄壳色三角帆蚌。