[发明专利]同步检测金葡菌A型和G型肠毒素的基于多表位串联肽的间接竞争ELISA方法

摘要

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种同步检测金葡菌A型和G型肠毒素的基于多表位串联肽的间接竞争ELISA方法。本发明的方法主要包括A型和G型肠毒素多表位串联肽SE A/G（包被抗原）的制备、兔抗SE A/G抗体的制备、样品前处理和基于多表位串联肽的间接竞争ELISA检测方法的建立。该间接竞争ELISA检测方法由以下步骤组成：1）包被；2）洗板；3）封闭；4）洗板；5）依次加入标准品、待测样品和特异性抗体；6）洗板；7）加入酶标二抗；8）洗板；9）显色和终止反应。本发明方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好的特点，适合于乳与乳制品等食品中金葡菌A型和G型肠毒素的快速和同步定量检测。

主权项

一种同步检测金葡菌A型和G型肠毒素的基于多表位串联肽的间接竞争ELISA方法，其特征在于包括如下步骤：步骤1）、制备金葡菌A型肠毒素和G型肠毒素B细胞多表位串联肽SEA/G；并制备获得兔抗多表位串联肽SE A/G特异性抗体；步骤2）、将所述多表位串联肽SE A/G作为检测抗原包被在酶标板的孔中，且酶标板的孔分成如下三类：空白对照孔、标准品阳性对照孔和样品孔；将蒸馏水加入已包被有所述检测抗原的空白对照孔中，将稀释成系列浓度的多表位串联肽SE A/G标准液加入到已包被有所述检测抗原的标准品阳性对照孔中，所述系列浓度的多表位串联肽SE A/G标准液包括浓度为零的多表位串联肽SE A/G标准液，将经过前处理的含有金葡菌A型和/或G型肠毒素的待测样品加入已包被有所述检测抗原的样品孔中；除空白对照孔外，向上述其余二类孔中均依次加入兔抗多表位串联肽SEA/G特异性抗体工作液、酶标二抗进行酶活性的放大作用，最后三类孔中均加入底物显色后终止反应，分别测定三类孔中液体的光密度（OD）值即吸光度值；步骤3）、以空白对照孔中液体测得的光密度（OD）值调零，在492nm处测定标准品阳性对照孔和样品孔中液体的光密度（OD）值；以系列浓度的多表位串联肽SE A/G标准液的吸光度值B除以0标准即0ng/mL的多表位串联肽SE A/G标准液的吸光度值B0，再乘以100%，即可得到竞争抑制率；以多表位串联肽SE A/G标准液浓度的对数为横坐标，竞争抑制率为纵坐标绘制标准曲线，进行线性回归，得出标准曲线的回归方程；同样的，测定待测样品的竞争抑制率，根据每个待测样品的竞争抑制率就可从标准曲线上读出对应的浓度，再乘以稀释倍数即为待测样品中金葡菌A型和/或G型肠毒素的实际含量。