[发明专利]一种双片苣苔组织培养及快速繁殖的方法

摘要

本发明公开了一种双片苣苔组织培养及快速繁殖的方法。本发明以双片苣苔叶片为外植体，通过筛选和优化初代诱导、继代增殖、生根和移栽培养基配方和培养条件，经过不定芽的初代诱导、继代增殖和生根培养以及试管苗的移栽阶段，实现珍稀观赏植物双片苣苔种苗的快速繁殖，一般只需110天就可以获得双片苣苔的幼苗，并且双片苣苔幼苗的成活率可达95%以上。因此本发明具有简单、快速和有效的特点，可以直接用于双片苣苔的繁育和保护，从而为该物种的遗传改良、种质资源保护和开发利用奠定基础。

主权项

一种双片苣苔组织培养及快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：a、外植体消毒处理：以双片苣苔（Didymostigma obtusum（Clarke）W.T.Wang）植株叶片为外植体，先用清水将外植体冲洗干净，消毒后再无菌水冲洗干净，得到消毒后的外植体；b、不定芽的初代诱导：将消毒后的外植体接种到诱导培养基上，在温度25±1℃、光照强度50μmol·m‑2·s‑1、光照时间12h·d‑1的条件下，叶片外植体诱导形成不定芽，所用的诱导培养基为：每升含有N‑苯基‑N′‑1，2，3‑噻二唑‑5‑脲2.0～3.0μmol、萘乙酸0.2μmol、蔗糖30g、琼脂5.5g，其余为MS培养基，pH为5.6；c、芽的继代增殖：将不定芽丛切成块，转入继代的培养基上，在温度25±1℃、光照强度50μmol·m‑2·s‑1、光照时间12h·d‑1的条件下，从生芽生长健壮成芽苗，所用的继代的培养基为：每升含有苄氨基嘌呤0.5μmol、蔗糖30g、琼脂5.5g、其余为MS培养基，pH为5.6；d、生根培养：将高3cm的芽苗分切转入生根培养基上，在温度25±1℃、光照强度50μmol·m‑2·s‑1、光照时间12h·d‑1的条件下，生根的试管苗形成，所述的生根培养基为：每升含有3‑吲哚丁酸2.0～4.0μmol、萘乙酸2.0μmol、蔗糖30g、琼脂5.5g、其余为1/2MS培养基，pH为5.8；e、试管苗移栽：将长好根的试管苗移栽到移栽基质中，放置于遮荫温室中培养，浇水保湿，其他按常规条件进行培养，由此得到双片苣苔幼苗，所用的移栽基质为：腐质土和黄泥土按质量比1∶1混合均匀。