[发明专利]一种鹅FSH的双抗体夹心ELISA检测方法

摘要

一种鹅FSH的双抗体夹心ELISA检测方法，包括双抗体夹心ELISA检测方法涉及的试剂盒步骤，首先克隆鹅的FSHα和FSHβ亚基基因的成熟肽编码序列，构建FSHα和FSHβ亚基基因的成熟肽编码序列的原核表达载体，表达并纯化His-FSHα和GST-FSHβ融合蛋白，再以它们为抗原获得羊抗鹅FSHα多克隆抗体及兔抗鹅FSHβ多克隆抗体分别作为检测抗体和捕获抗体；将FSHα和FSHβ亚基基因的成熟肽编码序列用CTP编码序列连接，构建成重组鹅FSHβ-CTP-α融合蛋白的真核表达载体，以哺乳动物细胞表达并纯化鹅Fc-FSHβ-CTP-α融合蛋白为标准品；建立检测鹅FSH的双抗体夹心ELISA方法。

主权项

一种鹅FSH的双抗体夹心ELISA检测方法，包括双抗体夹心ELISA检测方法涉及的试剂盒步骤，其特征在于，首先克隆鹅的FSHα和FSHβ亚基基因的成熟肽编码序列，然后构建FSHα和FSHβ亚基基因的成熟肽编码序列的原核表达载体，表达并纯化His‑FSHα和GST‑FSHβ融合蛋白，以His‑FSHα和GST‑FSHβ融合蛋白为抗原分别制备高效价、高特异性的羊抗鹅FSHα多克隆抗体及兔抗鹅FSHβ多克隆抗体；同时将FSHα和FSHβ亚基基因的成熟肽编码序列用CTP编码序列连接，构建成重组鹅FSHβ‑CTP‑α融合蛋白的真核表达载体，以哺乳动物细胞表达并纯化鹅Fc‑FSHβ‑CTP‑α融合蛋白；以羊抗鹅FSHα多克隆抗体为检测抗体，以兔抗鹅FSHβ多克隆抗体为捕获抗体，以Fc‑FSHβ‑CTP‑α融合蛋白为标准品，建立检测鹅FSH的双抗体夹心ELISA方法；     所述的鹅的FSHα亚基基因的成熟肽编码序列是序列表中SEQ ID No.1；所述的鹅的FSHβ亚基基因的成熟肽编码序列是序列表中SEQ ID No.2；所述的重组Fc‑FSHβ‑CTP‑α融合蛋白编码序列是序列表中的SEQ ID No.3。