[发明专利]铁皮石斛的种子组培繁殖方法

摘要

铁皮石斛的种子组培繁殖方法，属于中药材种植技术领域，包括引种灭菌、诱导培养、分化培养、壮苗和生根培养四大步骤；其有益效果是采用种子组培所得到的幼苗，不易退化，遗传形状稳定，有效物质含量与野生品种相近，保证了种子的质量；铁皮石斛的种子数量大，可以大大增加种子的繁殖数量；同时本发明方法还大大缩短了铁皮石斛的组培繁殖周期，从剪切种子到生根苗的组培周期仅需4～5个月，大大缩短了生产时间，降低了生产成本。

主权项

铁皮石斛的种子组培繁殖方法，包括引种灭菌、诱导培养、分化培养、壮苗和生根培养四大步骤，其特征在于具体方法如下：⑴引种灭菌：选取未开裂的野生铁皮石斛成熟果实，在流水下冲洗，放入1%洗洁精水溶液中搅拌5～8min，再用无菌水冲洗10～12min；在超净工作台上将果实放在70％的酒精中消毒20秒，再用0.1％的HgCl2水溶液浸泡7～9min，然后用无菌水冲洗5～6次；⑵诱导培养：将消毒处理后的果实在无菌环境中切开表皮，将果实切成0.1mm的方块，放入无菌水中摇晃，振荡均匀后用药勺接种在诱导培养基上，每瓶接种3～5块，在夜温22℃，日温24℃，相对湿度68%～70%，无光照的条件下进行种子诱导培养，15～20天后，种子开始萌动膨大；继续培养10天后，可以看到疏松状的原球茎雏形；此时将原球茎转入到促形培养基中，在夜温23℃，日温25℃，相对湿度70%～72%，光照强度1600lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长14小时的条件下进行种子萌发的原球茎促形培养，25～30天后，疏松状的原球茎雏形表面逐渐形成凹凸不平的颗粒物，随着培养时间的延长，颗粒物长大形成直径1～2mm的原球茎颗粒物；⑶分化培养：将生长状态良好的原球茎转接到分化培养基上，每瓶接种45～50颗，在夜温25℃，日温27℃，相对湿度73%～77%，光照强度1800lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行分化培养，在20～25天之内可观察到原球茎开始分化出芽点，然后将温度调整为夜温26℃，日温28℃，在第35～40天之内，可观察到原球茎长出小芽并开始分叶，到第50天可看到增殖芽长高1～1.5cm并带有2～3片小叶，得到分化苗；⑷壮苗及生根培养：将分化培养后的株高1～2cm、带有2～3片叶的试管苗接种于生根培养基上，每瓶接种10～15株，在夜温26℃，日温28℃，相对湿度73%～77%，光照强度2000lx，每天光照开始时间上午7:00，每天光照时长12小时的条件下进行生根培养，在第20～25天之内，基部开始出现2～3条约1cm长的白色根，每株苗有3～5条根，随后逐渐生长，到在第35～40天之内，生根率达到90％以上，根须长度1.5cm～2.0cm，苗高3～5cm，即得到铁皮石斛的生根苗，这时可进行炼苗，移栽；上述组培繁殖方法中，所提到的各阶段培养基的配方是：诱导培养基：N6 +NAA0.18mg／L+20%椰乳+2%蔗糖+活性炭200mg／L；pH=5.8；促形培养基：N6 +NAA0.25mg／L+20%椰乳+2%蔗糖+活性炭200mg／L；pH=5.8；分化培养基：N6+6～BA0.53mg／L+NAA0.20mg／L+10%香蕉汁+2%蔗糖+活性炭200mg／L；pH=5.8；生根培养基：N6+IBA0.5mg／L+10%香蕉汁+2%蔗糖+活性炭200mg／L；pH=5.6。