[发明专利]一种表达口蹄疫病毒空衣壳的重组山羊痘病毒的构建方法

摘要

本发明涉及一种表达口蹄疫病毒空衣壳的重组山羊痘病毒的构建方法，该方法以上、下游同源臂为基础构建转移质粒，中间依次插入口蹄疫病毒结构蛋白前体基因P1-2A、痘苗病毒背对背启动子P7.5-P11、黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因、口蹄疫病毒内部核糖体进入位点序列、口蹄疫病毒3C蛋白酶9位点突变体基因；将转移质粒与山羊痘病毒CVCCAV41株共转染MDBK细胞，以同源重组方式，将外源基因插入上、下游同源臂之间，筛选到的重组山羊痘病毒能稳定存在，并表达口蹄疫病毒空衣壳。

主权项

一种表达口蹄疫病毒空衣壳的重组山羊痘病毒的构建方法，其特征在于按下列步骤进行：a、以上、下游同源臂为基础构建转移质粒，中间依次插入口蹄疫病毒结构蛋白前体基因P1‑2A、痘苗病毒背对背启动子P7.5‑P11、黄嘌呤‑鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因、口蹄疫病毒内部核糖体进入位点序列、口蹄疫病毒3C蛋白酶9位点突变体基因，其中上游同源臂核苷酸序列为：5’―CTA TCT CGC GCT AAA TGA ATA CAA AAA AAT GAG AAT GTG TAA TAA AAT AAT TTC TGC TAT AGA TTA TCC AAA TAA AAA TCA CAT TTA TAG TGC GAT AAT AGA AAC TGT TAA CAA TTA CTT AGA TAA TCC TCC GAA AAA GCT AGG ATA CAA TAT TGA TAC TTG TTT GAC TAT AGC AAA AAA CAA TTA ACA ACT AAT CAT GGA TTT TAT ACG AAG AAA GTA TTT AAT ATA TAC AAT AGA AAA CAA AGT TGA TTT TTT AAA AGA TGA AGT ACTAAC AAA GAT ATC AAA CTT TAC ATT AAA TCA TAT ATT AGC CAT TAA ATA TTT AAT TCT TAA CTT TCC TAG AGA TGT TAT ATC AAA AGA TGT ATT ATC GAA CCC AAA TTT TTA TGT TTT TTT ACA TAT GGT AAA GTG TAA TGA CAT TTA TGA GAC TGT TTT AAA ACA TTC GTT CGA TAT TCC TAC GTT ATA TAT AAA AGC ACT TAT AAA AAA TTA TCC GTT ATT TAA TAA CAC AAT AGA AAG ATA TAA AAC TTT AGT TAG TGA ACT TTT TTT AGA CGA TAA ATT TAT CGA AAT AGT AAA ATA TTC GTC TGA ATT TGA TAA TAT CAT AGC TGT TAA TTA CGA TCT TTT ACT AAA TCC TTT ATT CTA TAA TAA TGA ACC GAT TAA AAA TAT GGA AAT TAT TTA TAG TAA ACT TTT TAA AAA ATC TAA TTT TAG GAA GGT AAA AAA AAT GGA GGT TAT CAG ATT AAT GAT ATG GGC GTA CTT AAG TAA ACA AGA TAC TGG ATT AGA TTT TAC TGA TTT TGA CTC TCA AGA TAT ATA TAC ACT GTT TCA AAA AAG TGA TAA AGT TAT TAT TCA TAG TGA TAT GAC AGA AAA GTT TAA AGA GTA TAT TTT TGG GTC GGA AAA AAC TAG TTA TTG GTT ATG GTT AA―3’；下游同源臂核苷酸序列为：5’―ATG AAT CAA TAT TTA ATG ATA ATG TCT ACA ATG AAG GGG TTG CAG AAT TAA TGT ACG ATA AAA TTC TTA GTT TTA TCT ATT CAG AGA TTA AAC AAG GAA GAG TAA ATA AGA ATA TGC TAA AAT TAG TTT ATA TAT TTG AAA ATG ATG AAT ATA TAC AGT CTA TTT TAT TAC AAA TAA TTT ACG GAG TAC CTG GTG ATA TCT TAT CAA TTA TAG ATG TAA AGG ATG ATA ACT GGA AAA AAT ATT TTA TAG GTT TTT ATA AAG AAA ATT TTA TCG ATG GAA AAA CTT TTA TAA GTG CAA AAA CAT TCA ACT ATG ATT TAT TTA AAG TAG TGG CTA AAA TAA ATC CTG AGT ACT TTG ACC CAG ACA AAA TAA TAT CCA TAT TTG ATC ATA AAC CTG AAA AAG TTA AAT ATT TTG ATA CAA TAG ATA TAA ATA ATA CAT TTA TAT CAA ATA TAA TTT ATG AAA CGA ATG AAT TAA ATC TTT CAA CGA TTG AAG AAT TAC AAT CAT GCC AAA TAT ATA ATG AAG AAA CAG AAT ATT TCA TTA AAG AAT ATA ATA CTT ATC TTT ATT TAA AGG AGA AGG ATC CAT ATA TTT TGT ATA ATG GCA TGT TAA CAA ATA TAT CAA AAG TTC CAT CAA ATA AAA AGT TTT CAT TGT TTA GTA AAA ACA TAT TAA AAT ATT ATA TAG ATG GAA AAT TGG CAA ATA TAG GTC TTG TGT TAC CAA ATT ATA AAG GTG ATA TAT TGG TAA AAA TAT TAT CGC ATT TGA AAT GTG TAG AAG ACG TTA CTG TTT TCA TTA AAT TTT CAG TAT GTA AAA ACT CTA GCA TAC TAC CAT CAA TA―3’；b、将转移质粒与山羊痘病毒CVCC AV41株共转染MDBK细胞，以同源重组方式，将外源基因插入上、下游同源臂之间，筛选到的重组山羊痘病毒能稳定存在，并表达口蹄疫病毒空衣壳。