[发明专利]一种利用促进剂SRpf富集高效联苯降解菌群的方法

摘要

本发明公开了一种利用促进剂SRpf富集高效联苯降解菌群的方法，该方法将促进剂SRpf添加至联苯降解菌的富集培养过程中，经不断驯化，获得具有高效联苯降解性能的富集液；促进剂SRpf的添加能显著提高菌体生长量、菌群多样性，及联苯降解率，具体为：菌体生长量提高30-50%、联苯降解率提高20-70%、香农多样性指数由1.56-1.70提高至2.10-2.34。本发明所涉及的促进剂SRpf具有复苏VBNC菌群，促进菌体生长的功能。因此，促进剂SRpf不仅可以用于富集高效联苯降解菌群，亦可用于促进其它有机污染物降解菌群的生长，为探索PCBs、PAHs等污染环境中潜在降解菌群，提供一种安全、廉价、高效的方法。

主权项

1.一种利用促进剂SRpf富集高效联苯降解菌群的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将藤黄球菌接种于LMM液体培养基，使其培养液OD_600nm为0.05-0.2；LMM液体培养基组成是：2.5-4.5g/L的NH₄Cl，1.0-2.0g/L的KH₂PO₄，0.005g/L的生物素，0.02g/L的L-蛋氨酸，0.04g/L的维生素B1，0.5-1.5g/L的肌苷，0.03g/L的MgSO₄，8.0-10.0g/L的L-乳酸锂盐，1.5-3.0ml/L的矿质盐溶液，pH为6.5-8.0；培养24-36h，获得种子培养液；（2）将步骤1获得的种子培养液按3-5%（v/v）的接种量接种至LMM液体培养基中，160r/min，培养48-60h，将发酵液离心（8000-10000r/min）10-15min去除菌体，经0.22μm过滤膜进行无菌过滤，所获得的上清液即为促进剂SRpf，其蛋白含量为23.96-25.34mg/L，保存于-20C条件下备用；（3）将步骤2获得的促进剂SRpf按体积分数为15%添加到以联苯为唯一碳源的无机盐培养基中，混匀后得富集培养基，其中无机盐培养基的组成是：1-2g/L的KH₂PO₄，2.5-3.5g/L的K₂HPO₄·3H₂O，0.2g/L的MgSO₄，0.02g/L的FeSO₄·7H₂O，1g/L的NaCl，2-4g/L的(NH₄)₂SO₄，0.01g/L的CaCl₂，2mL/L的微量盐溶液，pH为7.3-7.5，联苯为500-3000mg/L；（4）取PCBs污染土壤加入至步骤3获得的富集培养基中，PCBs污染土壤与富集培养基的质量体积比为35-65g/L；30℃、180-200r/min摇床培养，每代培养3-5d，传代培养5-6次，初始联苯浓度为500mg/L，以500mg/L递增，富集培养基中联苯浓度达2500-3000mg/L；（5）将步骤4获得的培养液按4-6%（v/v）的接种量接种至含500-4500mg/L联苯的无机盐培养基中，30℃、180-200r/min，培养24-64h。