[发明专利]一种青霉素菌渣中青霉素G的高效液相色谱检测方法

摘要

一种青霉素菌渣中青霉素G的高效液相色谱检测方法，它涉及一种青霉素菌渣中青霉素G的检测方法。本发明的目的要解决现有技术中无法快速、准确检测青霉素菌渣中青霉素G的问题。方法：一、绘制标准曲线，拟合标准曲线方程；二、提取，得到青霉素G提取液；三、活化处理；四、洗脱，得到待检测液；五、青霉素G的含量确定。本发明主要用于检测青霉素菌渣中青霉素G的含量。

主权项

一种青霉素菌渣中青霉素G的高效液相色谱检测方法，其特征在于青霉素菌渣中青霉素G的高效液相色谱检测方法是按以下步骤完成的：一、绘制标准曲线，拟合标准曲线方程：青霉素G标准品溶解于溶剂中，并利用溶剂稀释配制成浓度在0.1μg·mL‑1～2000μg·mL‑1之间不同梯度浓度的青霉素G标准溶液，然后采用0.45μm针头过滤器过滤，利用高效液相色谱法进行检测，以色谱峰面积为纵坐标、以青霉素G标准溶液浓度为横坐标将高效液相色谱法检测绘制成标准曲线，然后进行拟合，得到标准曲线方程：Y=kX+b，方程中Y表示色谱峰面积，X表示青霉素G的浓度，k和b为常数；所述的溶剂由乙腈和水按乙腈与水的体积比为1:1混合而成；二、提取：首先将青霉素菌渣加入提取液中，混合均匀后超声提取25min～35min，然后进行离心分离，离心分离得到的上清液即为青霉素G粗提液，向青霉素G粗提液中加入无水硫酸钠和正己烷，再次进行离心分离，离心分离后分三层，取中间层，即为青霉素G提取液；所述的青霉素菌渣的质量与提取液的体积比为1g:(3mL～5mL)；所述的提取液由乙腈和质量分数为0.3%的甲酸水溶液按乙腈与质量分数为0.3%的甲酸水溶液的体积比为3:1混合而成；所述的无水硫酸钠与青霉素菌渣的质量比为(0.8～1.2):1；所述的正己烷的体积与青霉素菌渣的质量比为(0.8mL～1.2mL):1g；三、活化处理：首先采用5.0mL甲醇过Waters Oasis‑C18固相萃取小柱，然后采用5.0mL蒸馏水过Waters Oasis‑C18固相萃取小柱，即完成Waters Oasis‑C18固相萃取小柱活化处理；四、洗脱：在过柱流速为1.0mL·min‑1～3.0mL·min‑1和真空条件下将步骤二得到的青霉素G提取液过步骤三得到的活化处理后Waters Oasis‑C18固相萃取小柱，然后采用质量分数为5%的甲醇水溶液淋洗，再采用洗脱液进行洗脱，洗脱得到的液体在水浴温度为24℃～26℃下N2吹干，然后加入复溶溶剂溶解N2吹干得到的固体，然后采用0.45μm针头过滤器过滤，得到待检测液；所述的洗脱液的体积与步骤二中所述的青霉素菌渣的质量比为(0.6mL～1.0mL):1g；所述的洗脱液由乙腈和甲醇按乙腈与甲醇的体积比为3:1混合而成；所述的复溶溶剂的体积与步骤二中所述的青霉素菌渣的质量比为0.2mL:1g；所述的复溶溶剂由乙腈和水按乙腈与水的体积比为1:1混合而成；五、青霉素G的含量确定：利用高效液相色谱法进行检测步骤四得到的待检测液，根据色谱峰面积，利用外标法由步骤一得到的标准曲线方程：Y=kX+b计算步骤四得到的待检测液中青霉素G的浓度，根据青霉素G的浓度计算出步骤四得到的待检测液中青霉素G的质量，即确定青霉素菌渣中青霉素G的含量。