[发明专利]一种固定化核酸酶及其制备方法

摘要

本发明属于生物医药领域，涉及一种固定化核酸酶及其制备方法。本发明的固定化核酸酶由核酸酶和固相载体组成，核酸酶通过共价键与固相载体上的基团相连接。本发明的固定化核酸酶活性大于500U/g，作用的pH范围为6～8，最适作用温度为37℃。本发明还公开了一种制备固定化核酸酶的方法。本发明的固定化核酸酶应用于医药产品的工艺中，在产品分离纯化过程中避免了核酸酶残留在终产品中，提高了产品质量。

主权项

1.一种制备固定化酶的方法，其特征在于：Sepharose‑4B凝胶，于G3砂芯漏斗内抽去保护液，称湿重50g凝胶Sepharose‑4B，用500ml，0.5mol/LNaCL溶液淋洗，用蒸馏水洗净；称取15g BrCN，加入15ml乙腈将其溶解；50g凝胶加入75ml 0.2mol/L，pH10.0的Na2CO3‑NaHCO3缓冲液，置冰浴中，缓慢搅拌；向烧杯内滴加BrCN溶液使它与Sepharose‑4B凝胶反应，同时滴加6mol/L NaOH，使反应液中的pH维持在10.0；将BrCN加完后继续反应5分钟，此时反应液中的pH不再下降，维持在10.0，停止反应；将活化反应物迅速转移到G3砂芯漏斗内抽滤，预冷的蒸馏水淋洗，最后浸泡在100ml 0.1mol/L，pH9.5的Na2CO3‑NaHCO3缓冲液中准备偶联；核酸酶溶液浓缩到10mg/ml以上，对0.1mol/L，pH9.5的Na2CO3‑NaHCO3缓冲液充分透析，测定蛋白浓度10mg/ml；50ml核酸酶溶液加入已经活化处理好的Sepharose‑4B凝胶，混匀，在4℃振荡偶联24小时，终止偶联；将偶联物转移到G3砂芯漏斗内，用500ml，0.5mol/LNaCL溶液抽滤，淋洗；凝胶用500ml蒸馏水洗，用150ml0.1mol/L甲酸‑0.5mol/L氯化钾，pH2.5甲酸混合液洗，最后用蒸馏水洗至pH6.5，其中所述的核酸酶为粘质沙雷氏菌非特异性核酸内切酶。