[发明专利]一种侧胞芽孢杆菌WY9701制剂的固体发酵生产方法

摘要

本发明属于微生物领域，涉及采用侧胞芽孢杆菌WY9701通过固体发酵制备微生态制剂的方法。接种于经过优化的固体发酵培养基中，30~33℃培养，经过三级放大而进行大规模发酵生产。生产工艺简单稳定，活菌体密度高，发酵产物无需分离纯化可以直接干燥使用，操作简单，效果稳定，能耗低，降低了生产成本，提高了生产效率，易于推广使用。

主权项

一种侧胞芽孢杆菌WY9701制剂的制备方法包括以下步骤：   （1） 菌种活化：    本发明采用侧胞芽孢杆菌（Brevibacillus laterosporus）WY9701作为发酵菌种，菌种保藏编号：SCTCC 100657，购于中国工业微生物菌种保藏中心，将‑80℃保存的侧胞芽孢杆菌WY9701菌种在种子培养基（胰化蛋白胨 10g，酵母提取物 5g，NaCl 10g，25%浓度MnSO4添加至0.2%，琼脂粉15g，调pH8.0，加水至1升，高温高压灭菌备用）固体斜面上划线，33℃培养24~48小时；   （2）制备一级种子：    将活化的侧胞芽孢杆菌WY9701菌种，用接种环挑取一环接种于200 mL 液体种子培养基中（胰化蛋白胨 10g，酵母提取物 5g，NaCl 10g，25%浓度MnSO4添加至0.2%，调pH8.0，加水至1升，高温高压灭菌备用），将三角瓶置于摇床中，33℃，250rpm，振荡培养24~48小时后，制得一级种子液；   （3）配制固体发酵培养基：固体干基：以玉米粉、小麦粉和豆饼粉为基础料（玉米粉40~70%；小麦粉15~30%；豆饼粉5~15%），葡萄糖1.5%，NaCl 0.6%，KH2PO4 0.3%，MnSO4·H2O 0.04%；将固体干基加入质量比为1:1~2的无菌水，pH值为自然条件，搅拌均匀；将固体培养基经121℃、20min高温高压灭菌，待冷却后即可作为固体发酵培养基使用；   （4）固体发酵：将经过灭菌处理的固体发酵培养基按照3~5%的接种量接入一级种子菌，搅拌均匀，保持湿度为40~60%，温度为30~33℃培养24~28个小时，制得二级种子；将二级种子按照3~5%的接种量加入灭菌固体发酵培养基中进行扩大培养，搅拌均匀，保持湿度为40~60%，温度为30~33℃培养24~48个小时，制得三级种子；可以根据具体的培养用量，进一步将三级种子按照3~5%的接种量进一步扩大培养；将侧胞芽孢杆菌WY9701培养物进行菌落计数，活菌体浓度可达1.0~2.5×109 CFU/g 鲜曲，芽孢形成率在90%以上；    （5）将固体发酵的侧胞芽孢杆菌WY9701培养物进行低温干燥或者50~65℃干燥不超过60min，粉碎和包装，制成产品。