[发明专利]一种林蛙蛋白和骨钙的提取方法

摘要

一种林蛙蛋白和骨钙的提取方法，步骤为：将剔去林蛙肉后的林蛙皮及林蛙骨清洗破碎后，加入胃蛋白酶酶解，离心，取上清液备用；分离出的残渣再加入木瓜蛋白酶继续酶解，离心，取上清液将两次酶解上清液；合并两次酶解所取的上清液，纳米滤膜过滤，将截留的大分子蛋白，冷冻干燥，得林蛙蛋白；酶解后的残渣加入乳酸菌和天然西红柿培养基发酵，组织破碎，离心，取上清与酶解步骤透过纳米滤膜的流出液合并，浓缩干燥，得林蛙骨钙。采用分步酶解，增加了林蛙蛋白的产出，酶解后的残渣用乳酸菌发酵富集，得到第二种提取物林蛙骨钙，提高了林蛙活性成分获取率；采用纳米滤膜富集、冷冻干燥，保持了蛋白和多肽的活性。工艺过程简单，无环境污染。

主权项

一种林蛙蛋白和骨钙的提取方法，其特征是包括下述步骤：（1）将林蛙剔去蛙肉，取其皮、骨清洗破碎；（2）向破碎后的林蛙皮、骨混合物中加入其重量1/1000—1/750的胃蛋白酶和8—10倍重量的水，在PH6‑8的条件下37‑45℃酶解5‑10小时，离心，取上清液备用；（3）将步骤（2）分离出的残渣加入原林蛙皮、骨混合物重量1/1000—1/750的木瓜蛋白酶和8—10倍重量的水，在PH6‑8的条件下37‑45℃继续酶解5‑10小时，离心，取上清液备用；（4）将步骤（2）和步骤（3）得到的酶解上清液合并，用分子量500‑1000的纳米滤膜收集，被截留的大分子蛋白，冷冻干燥，得林蛙蛋白；（5）将步骤（3）酶解后的残渣加入原林蛙皮、骨混合物重量2%—10%的乳酸菌和2‑10倍重量的天然西红柿培养基，再加入培养基重量的1%‑5%的葡萄糖，发酵30‑40小时，组织破碎，离心，取上清液，将本步骤中所得上清液与步骤（4）透过纳米滤膜含小分子量蛋白的流出液合并，浓缩干燥，得林蛙骨钙。