[发明专利]无菌斑马鱼的生产方法

摘要

本发明公开了一种无菌斑马鱼的生产方法。该方法包括如下步骤：1）将斑马鱼受精卵置于AB-GZM溶液中，于25-29℃培养3-8h；2）用所述AB-GZM溶液漂洗；3）用0.005g/L的聚维酮碘水溶液浸泡1-2min；4）用无菌GZM溶液漂洗；5）用漂白剂漂白10-20min；6）用所述无菌GZM溶液漂洗，漂洗后，将受精卵置于所述无菌GZM溶液中培养，温度为25-29℃，光周期为L10：D14至L14：D10；7）待胚胎孵化后，每天进行所述无菌GZM溶液的半量换液；从孵化后的斑马鱼中获得无菌斑马鱼。本发明通过自然繁殖获得斑马鱼受精卵，最终获得无菌斑马鱼；本发明为研究微生物与斑马鱼之间的相互作用及多生物学进程提供了方便的材料，对进一步研究微生物和其脊椎动物宿主之间关系的内在机制也具有十分重要的参考意义。

主权项

无菌斑马鱼的生产方法，包括如下步骤：（1）将离体的斑马鱼受精卵置于AB‑GZM溶液中，于25‑29℃培养3‑8h；（2）将步骤（1）处理后的所述受精卵用所述AB‑GZM溶液进行漂洗；（3）将步骤（2）漂洗后的所述受精卵置于浓度为0.005g/L的聚维酮碘水溶液中，浸泡1‑2min；（4）将步骤（3）浸泡后的所述受精卵用无菌GZM溶液进行漂洗；（5）将步骤（4）漂洗后的所述受精卵用漂白剂漂白10‑20min；（6）将步骤（5）漂白后的所述受精卵用所述无菌GZM溶液进行漂洗，漂洗后将所述受精卵置于所述无菌GZM溶液中培养，培养温度为25‑29℃，光周期为L10：D14至L14：D10，直至所述受精卵孵化得到幼体鱼；（7）对所述幼体鱼每天进行所述无菌GZM溶液的半量换液培养，直至所述幼体鱼长成为目的大小的斑马鱼，从所述目的大小的斑马鱼中获得目的无菌斑马鱼；所述GZM溶液的溶剂为水，溶质为海盐；所述海盐在所述GZM溶液的含量为每升所述GZM溶液中含有60mg所述海盐；所述AB‑GZM溶液的溶剂为水，溶质及其浓度如下：250ng/mL的两性霉素B、5μg/mL的卡那霉素、100μg/mL的氨苄霉素、10U/ml的青霉素、10U/ml的链霉素、59μg/mL的海盐。