[发明专利]一种富硒羊肚菌多糖的制备方法

摘要

本发明公开了一种富硒羊肚菌多糖的制备方法，旨在克服目前富硒食用菌含硒量低、对无机硒的转化程度低、安全系数低与多糖含量低的问题，其步骤:1.富硒羊肚菌的制备：制备培养基-菌种活化-深层发酵即得到富硒羊肚菌菌丝球;2.富硒羊肚菌胞内粗多糖的提取：富硒羊肚菌菌丝球经清洗、烘干、粉碎、过筛后称量-加入蒸馏水-离心取上清液-离心收集沉淀物-置于真空干燥箱中干燥2h即得到富硒羊肚菌胞内粗多糖；3.富硒羊肚菌胞内粗多糖的纯化：采用大孔树脂AB-8分离，得到富硒羊肚菌多糖洗脱曲线，收集曲线洗脱峰部位的洗脱液，进行下一步纯化；凝胶柱层析，绘制富硒羊肚菌多糖洗脱曲线，收集曲线洗脱峰部位的洗脱液，得富硒羊肚菌多糖。

主权项

一种富硒羊肚菌多糖的制备方法，其特征在于，所述的一种富硒羊肚菌多糖的制备方法的步骤如下：1）富硒羊肚菌的制备（1）制备培养基：a.制备斜面培养基;b.制备深层发酵培养基;（2）菌种活化：将所有器具通过紫外线杀菌30min后，在无菌环境下用接种环挑取保藏的粗柄羊肚菌926号，转接到新鲜的斜面培养基上，在25℃恒温培养箱中培养24h；（3）深层发酵：菌种活化后，取约5mm2大小的菌种10块接入深层发酵培养基，同时加入的亚硒酸钠，使深层发酵培养基中硒浓度达到80μg/ml，250mL三角瓶装料100mL，置于振荡培养箱中，培养温度为26℃，振荡培养箱的振荡频率100rpm，培养时间5天，得到富硒羊肚菌菌丝球；2）富硒羊肚菌胞内粗多糖的提取（1）富硒羊肚菌菌丝球经清洗、烘干、粉碎、过筛后称量，按菌丝球与蒸馏水为1：30的比例加入蒸馏水，进行微波协同超声波辅助提取，然后置于水浴锅中，在90℃下热水浸提140min，将浸提液以4000r/min的转数在离心机中离心15min，取上清液；（2）上清液经低温浓缩后，在搅拌下加入3倍体积的95%乙醇，将醇析液在4℃冰箱中静置12h，采用离心机分离收集沉淀物；（3）将收集的沉淀物复溶于蒸馏水中，按样品与Sevag试剂为5:1的比例充分混匀，置于分液漏斗中，静置20min后弃去下层有机层及两相界面上的蛋白质变性层，取上层液重复本步骤处理7～8次，直到有机层与水层间无白色胶状物产生为止，此时上层液体为羊肚菌胞内粗多糖溶液；（4）取上层羊肚菌胞内粗多糖溶液浓缩、醇沉后收集沉淀物，然后分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤2次，最后将沉淀物小心刮入称量皿中，置于40℃真空干燥箱中干燥2h，即得到固态富硒羊肚菌胞内粗多糖；3）富硒羊肚菌胞内粗多糖的纯化1）采用AB‑8大孔树脂分离，得到富硒羊肚菌多糖洗脱曲线，收集曲线洗脱峰部位的洗脱液，进行下一步纯化；2）Sephadex G‑100凝胶柱层析，绘制富硒羊肚菌多糖洗脱曲线，收集曲线洗脱峰部位的洗脱液，得富硒羊肚菌多糖。