[发明专利]原发性IgA肾病肾脏组织差异表达miRNA的分析方法和应用

摘要

本发明涉及一种原发性IgA肾病肾脏组织差异表达miRNA的分析方法，其通过高通量测序技术对原发性IgA肾病患者和正常组的肾脏组织总RNA分析处理得到原发性IgA肾病肾脏组织差异表达miRNA，深入研究这些差异表达的miRNA将有助于进一步阐明原发性IgA肾病的发病机理，为原发性IgA肾病的诊断和治疗提供新途径。上述原发性IgA肾病肾脏组织差异表达miRNA的分析方法设计合理可行，能够有效地协助建立一种原发性IgA肾病差异表达miRNA的图谱模型，获取作为中间结果的原发性IgA肾病的相关信息。

主权项

一种原发性IgA肾病肾脏组织差异表达miRNA的分析方法，其特征在于，包括如下步骤：采集原发性IgA肾病患者和正常组的肾脏组织的细胞总RNA，用15%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化出18～30nt长度的小RNA分子，将分离出的小RNA分子经反转录处理后形成cDNA片段，再对形成的cDNA片段的两端加上接头序列，经RT‑PCR扩增后形成RNA文库；对构建的所述RNA文库进行测序，然后对测序所得的序列进行去接头、去污染处理得到干净的小RNA分子序列并对所得的序列进行长度分布分析，去除重复序列、rRNA、tRNA、mRNA降解片段、scRNA、snoRNA、snRNA及piRNA，将剩余的序列与miRNA数据库中人miRNA序列进行比对分析，获得原发性IgA肾病患者和正常组的已知miRNA的表达量信息；以及将原发性IgA肾病患者和正常组中表达的已知miRNA的表达量归一化到同一量级，归一化公式为：归一化表达量=miRNA表达量/样品总表达量*10⁶，使用Audic and Claverie test的统计方法比较原发性IgA肾病患者和正常组的miRNA表达差异，得到所述原发性IgA肾病肾脏组织差异表达miRNA。