[发明专利]以黏土为载体的固定化脂肪酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种以黏土为载体的固定化脂肪酶的制备方法，首先将黏土与水和絮凝剂混匀，将得到的料浆注入模具内成型，干燥后将黏土在一定温度下煅烧，然后粉碎、分筛，再对分筛好的黏土分别进行羟基化和硅烷化处理，将处理好的黏土载体加入用缓冲液配好的脂肪酶溶液中，经摇床振荡吸附，吸附完成后，用缓冲液清洗黏土，直到没有蛋白洗脱下来，冷冻干燥得到固定化脂肪酶；本方法采用的黏土具有原料易得，价格低廉的特点，同时也具有很好的物理吸附性和表面化学活性，经过改性处理后，能显著提升载体的吸附性能，制得的固定化酶不仅反应酶活高，而且比游离脂肪酶有着更好的催化活性。

主权项

一种以黏土为载体的固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）黏土载体的预处理：将黏土与水以质量比为5:2‑4的比例混匀，在恒速搅拌下，逐渐加入絮凝剂，加入比例为每克黏土添加0.3‑0.7g絮凝剂，混匀后料浆成型、阴凉处干燥48‑72h，干燥后的黏土在500‑700℃下煅烧2‑4h，粉碎，分筛成粒度为20‑120目的颗粒； （2）黏土载体的羟基化处理：按每克预处理黏土添加10‑15ml盐酸的比例，在预处理后的黏土中加入盐酸，并在60‑80℃的水浴中充分搅拌10‑30min后，抽滤，将得到的黏土用去离子水洗涤至洗涤液的pH=7，烘干；（3）黏土载体的硅烷化处理：按每克羟基化处理的黏土添加3‑4ml石油醚和0.03‑0.04 mL硅烷化试剂的比例，在羟基化处理的黏土中加入石油醚和硅烷化试剂，充分混匀后，常温下放置于摇床中反应1‑3 h，待反应结束后，过滤，滤渣分别用石油醚和无水乙醇洗涤3‑5次，烘干；（4）脂肪酶的固定化：按给酶量为20‑60mg/g的比例向脂肪酶溶液中加入20‑120目硅烷化黏土，密封，在20‑40℃下振荡固定0.5‑4h后，抽滤，滤渣用缓冲液洗涤直至没有蛋白洗脱下来，然后冷冻干燥，即得到固定化脂肪酶。