[发明专利]一种提高结缕草高频再生系循环转化利用的方法

摘要

本发明公开了一种提高结缕草高频再生系循环转化利用的方法。该方法包括利用结缕草高频再生愈伤组织系进行基因转化的方法，利用结缕草高频再生愈伤组织系得到的再生植株茎节进行基因转化的方法，结缕草再生植株茎节的再生方法及其培养基。本发明所提供的上述方法为结缕草高频再生系的循环利用及基因转化提供了一个高效的途径，在结缕草的研究和生产领域具有广阔的应用前景。

主权项

一种获得转基因结缕草愈伤组织的方法，包括如下步骤：将结缕草愈伤组织用含目的基因的根癌农杆菌侵染后进行共培养，最后获得表达目的基因的转基因结缕草愈伤组织，其特征在于： 所述结缕草愈伤组织来源于按照包括如下步骤的方法制备得到的结缕草再生愈伤组织系： 将单粒结缕草种子依次经诱导培养、第一次继代培养、第二次继代培养、第三次继代培养，得到结缕草再生愈伤组织系； 所述诱导培养、所述第一次继代培养、所述第二次继代培养和所述第三次继代培养采用的培养材料均源自同一个种子； 所述诱导培养为将所述结缕草种子在诱导培养基中诱导培养，得到诱导愈伤组织； 所述第一次继代培养为将所述诱导愈伤组织在第一代继代培养基中第一代继代培养，得到第一次愈伤组织； 所述第二次继代培养为将所述第一次愈伤组织在第二代继代培养基中第二代继代培养，得到第二次愈伤组织； 所述第三次继代培养为将所述第三次愈伤组织在第三代继代培养基中第三代继代培养，得到再生愈伤组织系； 所述诱导培养基为在MS基本培养基中添加具有如下终浓度的各组分：终浓度2mg/L的2,4‑D、终浓度的0.15mg/L6‑BA、终浓度30g/L的蔗糖、终浓度7.0g/L的琼脂、终浓度0.5g/L的水解酪蛋白、终浓度1mg/L的VB1、终浓度1mg/L的VB2； 所述第一代继代培养基为在MS基本培养基中添加具有如下终浓度的各组分：终浓度为1mg/L的2,4‑D、终浓度为0.2mg/L的6‑BA、终浓度为0.2mg/L的ABA、终浓度为40g/L的蔗糖、终浓度为9.0g/L的琼脂、终浓度为0.5g/L的水解酪蛋白、终浓度为1mg/L的VB1和终浓度为1mg/L的VB2； 所述第二代继代培养基为将所述第一次继代培养基中的蔗糖终浓度调整为35g/L、琼脂终浓度调整为8.0g/L，其他组分和终浓度不变； 所述第三代继代培养基为将所述第二次继代培养基中的蔗糖终浓度调整为30g/L、琼脂终浓度调整为7.0g/L，其他组分和终浓度不变。