[发明专利]一种防治作物土传病害生防菌剂的制备方法及其应用

摘要

本发明提供一种用于防治作物土传病害的生防菌剂的制备方法及其应用。采用木霉菌株（Trichodermaviride）为母菌剂，以草炭粉、秸秆粉和树叶粉，硅藻土和轻质碳酸钙为载体制成生防菌制剂，并以微量杀菌剂恶霉灵作为增效剂。用于防治由镰孢菌等病原真菌引起的作物土传病害。本发明的特征在于利用木霉菌对恶霉灵的敏感性差异将木霉菌生防菌剂与恶霉灵协同施用，具有既能抑制土壤中病原菌萌发，又能促进木霉菌的繁殖，同时促进作物根系生长的多重协同功效。

主权项

一种防治作物土传病害生防菌剂的制备方法，其特征在于包括如下具体步骤：(1)斜面母菌种的制备：取作物根表土壤5‑10克，加无菌水1000倍成稀释液；取马铃薯150‑200克、葡萄糖15‑20 克、孟加拉红0.04‑0.07克、硫酸链霉素0.03‑0.04克、恶霉灵0.1‑0.2克、琼脂17‑20克、水1000毫升制成菌种培养液；将稀释液与菌种培养液按1∶9的重量比例一起倒入培养皿内制成平板，25‑28℃下培养48小时，经分离获得木霉菌菌株，经纯化后转移至试管斜面内作斜面母菌种；(2)二级菌种的制备：取马铃薯150‑200克、葡萄糖或蔗糖15‑20克、水1000 毫升，配制成二级发酵培养液，调pH值为6‑8，分装在250‑500毫升三角瓶中，装液量为100‑200毫升，在121℃下灭菌30‑40分钟，接入斜面母菌种，摇床转速为150‑200转/分，发酵温度26‑30℃，发酵时间为2‑4天，得到大量发散的絮状菌丝及分散的分生孢子二级菌种；      (3)固体发酵：所采用的固体发酵培养基成分为：培养料草炭或秸秆粉或树叶粉28‑40克、稻壳10‑12克、水50‑60克、磷酸二氢钾0.1‑0.2克、硫酸镁0.1‑0.2克、硫酸钙0.1‑0.2克；先将无机盐溶入水中，再将培养料与水充分混合后制成固体发酵培养基，固体发酵培养基装入耐高温塑料袋或发酵瓶中，在120℃下灭菌70‑90分钟，接入重量比例5‑10％的二级菌种，控制发酵温度为25‑30℃，发酵时间4‑6天，至培养料变成绿色即木霉菌分生孢子；(4) 作物土传病害生防菌剂的制备：将满载木霉菌孢子的固体培养料经常温干燥后，用万能粉碎机粉碎成高浓度木霉菌孢子粉，取重量比例为30‑49.99％孢子粉与重量比例为50‑69.99％轻质碳酸钙或硅藻土，再加入重量比例为0.01％的恶霉灵作为增效剂, 充分混合后制成木霉菌制剂。